[发明专利]无细胞百日咳疫苗的制备方法有效
申请号: | 201210027499.6 | 申请日: | 2012-02-08 |
公开(公告)号: | CN103242434B | 公开(公告)日: | 2020-03-17 |
发明(设计)人: | 王雪云;王长永;谷义平;徐艳艳;姜涛;曾红;柏建力;崔善海;夏富文;王洪飞 | 申请(专利权)人: | 长春百克生物科技股份公司 |
主分类号: | C07K14/235 | 分类号: | C07K14/235;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;A61K39/10;A61P31/04 |
代理公司: | 北京北翔知识产权代理有限公司 11285 | 代理人: | 张广育;胡洪慧 |
地址: | 130012 吉林省*** | 国省代码: | 吉林;22 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明涉及一种制备无细胞百日咳疫苗的方法,所述方法包括将百日咳杆菌培养上清液进行超滤浓缩处理,从而得到浓缩液;将所述浓缩液进行阳离子交换柱层析,分离出百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA);任选地,将在步骤2)中得到的流穿液进行多结合性阴离子交换层析,分离出百日咳粘着素(Prn),或者将百日咳杆菌菌体溶解、浓缩,并进行硫酸铵沉淀和多结合性阴离子交换层析,分离出百日咳粘着素(Prn);将PT单独制成无细胞百日咳疫苗,或者将PT同FHA和/或Prn混合在一起制成无细胞百日咳疫苗。 | ||
搜索关键词: | 细胞 百日咳 疫苗 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种从百日咳杆菌培养上清液分离纯化百日咳有效抗原成分的方法,所述方法包括以下步骤:1)将百日咳杆菌培养上清液进行超滤浓缩(切向流超滤浓缩)处理,从而得到浓缩液;2)对所述浓缩液进行阳离子交换柱层析(CM‑Sepharose柱层析),分离出百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA);3)任选地,将在步骤2)中得到的流穿液进行多结合性阴离子交换层析(Capto‑adhere柱层析),分离出百日咳粘着素(Prn),或者将百日咳杆菌菌体溶解、浓缩,并进行硫酸铵沉淀和多结合性阴离子交换层析(Capto‑adhere柱层析),分离出百日咳粘着素(Prn)。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于长春百克生物科技股份公司,未经长春百克生物科技股份公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201210027499.6/,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:一种再生氟橡胶配方
- 下一篇:一种苯甲基淀粉的制备方法
- 同类专利
- OmpA突变增强百日咳博德特氏菌中OMV产生-202180074521.X
- P·A·范德莱;A·J·斯洛特斯;A·A·J·范德阿尔克 - INTRAVACC有限责任公司
- 2021-09-03 - 2023-07-14 - C07K14/235
- 本发明涉及突变博德特氏菌(Bordetella)OmpA多肽。包含所述突变多肽的博德特氏菌具有高起泡表型。因此,本发明进一步涉及一种产生OMV的方法,其中所述方法包括在有利于产生OMV的条件下培养包含修饰的OmpA多肽的博德特氏菌属细菌群的步骤。此外,本发明涉及由包含突变OmpA多肽的博德特氏菌产生的OMV,以及此类OMV治疗和预防博德特氏菌感染的用途。
- 一种用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白及其应用-202011338163.2
- 朱伟峰;谭凯;王芳;程序;仇汝龙;范志宇;陈露 - 江苏省农业科学院
- 2020-11-25 - 2022-09-09 - C07K14/235
- 本发明属免疫生物学领域,提供了一种截短表达的支气管败血波氏菌BcfA重组蛋白及其制备方法和应用,通过截短表达提高BcfA重组蛋白的表达量和可溶性。对BcfAN端373位氨基酸残基之后的序列进行了克隆和表达,截短后的BcfA的表达量提高了10倍,且主要为可溶性表达。Western blot结果显示,截短表达后的BcfA依然与支气管败血波氏菌感染康复血清反应明显。免疫保护力实验表明BcfA的截短表达重组蛋白依然对支气管波氏败血波氏菌表现出良好的免疫保护作用。通过截短表达提高了BcfA重组蛋白的表达量和可溶性,为后期研制以BcfA重组蛋白抗原为基础的基因工程疫苗奠定了基础。
- 一种百日咳多种抗原成分的分离纯化方法-201711481603.8
- 胡业勤;田聪;潘聪;曾赟;周昉;陈雯;朱德武;段凯;李新国;瞿明霞 - 武汉生物制品研究所有限责任公司
- 2017-12-29 - 2021-09-07 - C07K14/235
- 本发明涉及一种百日咳多种抗原成分的分离纯化方法,所述的多种抗原为百日咳毒素(PT)抗原、丝状血凝素(FHA)抗原和百日咳黏附素(PRN)抗原,所述的方法包括如下步骤:(1)百日咳菌株发酵培养,分别收获培养液上清和菌体沉淀;(2)从培养液上清中分离纯化PT抗原,从菌体沉淀中分离纯化PRN抗原和FHA抗原。
- IL-8-结合抗体及其应用-201680054135.3
- 井川智之;前田敦彦;中村元气;村冈优 - 中外制药株式会社
- 2016-08-05 - 2021-07-09 - C07K14/235
- 一个非排他性的方面提供作为药物优异的新型IL‑8抗体。
- 百日咳菌毛蛋白的纯化方法-202011186126.4
- 杨晓明;杨柏峰;田聪;潘聪;胡源;霍梦颖;陈雯;胡太平;施斌;李新国;段凯;朱德武 - 武汉生物制品研究所有限责任公司
- 2020-10-29 - 2021-02-09 - C07K14/235
- 本发明涉及一种百日咳菌毛蛋白的纯化方法,所述方法包括以下步骤:(1)百日咳菌经发酵培养后离心收集沉淀,尿素或其他适宜方法裂解菌体后得到PRN粗纯液,经层析后收集流穿液;(2)采用盐析级联疏水阴离子层析菌毛蛋白(Fim)粗纯液;(3)调节步骤(2)中收集的菌毛蛋白(Fim)粗纯液pH和电导,过CHT层析柱洗脱收集得到Fim抗原。
- 包括亲和色谱法过程的获得百日咳鲍特菌来源蛋白质的方法-201980022292.X
- 朴钟冠;文在勋;崔起燮;安东浩;全亨珍;金惠连;崔普渼 - 株式会社绿十字
- 2019-03-15 - 2020-11-10 - C07K14/235
- 本发明涉及包括亲和色谱法过程的获得百日咳鲍特菌(Bordetella Pertussis)来源之蛋白质的方法。本发明通过以使用蓝色亲和柱的纯化过程而分离百日咳鲍特菌的PT和FHA蛋白提高了PT和FHA蛋白的生产产率。另外,与使用尺寸排阻色谱法(SEC)过程的分离方法相比,当使用该过滤过程时,可显著提高靶蛋白的产出。此外,使用蓝色亲和柱用于分离PT和FHA蛋白的方法降低了树脂费用、操作时间、缓冲剂消耗和生产成本,并且显著提高了PT和FHA蛋白的生产率。
- 包括冷冻和解冻过程的获得百日咳杆菌来源的蛋白质的方法-201880048447.2
- 安东浩;崔起燮;文在勋;全亨珍;朴钟冠;金惠连;崔普渼 - 株式会社绿十字
- 2018-07-23 - 2020-05-22 - C07K14/235
- 本发明涉及一种获得百日咳杆菌来源的PRN蛋白的方法,该方法包括能够有效提高PRN蛋白的提取水平的冷冻和解冻过程。在本发明中,发现当在用尿素处理之前将粒料冷冻,然后在低温下缓慢融化时,与在其他条件下的实验组相比,PRN蛋白的提取水平有效地增加。另外,即使当该方法应用于大规模生产时,也有效地提高了PRN提取水平。因此,包括冷冻和解冻过程的百日咳杆菌的预处理方法,可以有效地用于批量生产为百日咳疫苗所用的PRN。
- 无细胞百日咳疫苗的制备方法-201210027499.6
- 王雪云;王长永;谷义平;徐艳艳;姜涛;曾红;柏建力;崔善海;夏富文;王洪飞 - 长春百克生物科技股份公司
- 2012-02-08 - 2020-03-17 - C07K14/235
- 本发明涉及一种制备无细胞百日咳疫苗的方法,所述方法包括将百日咳杆菌培养上清液进行超滤浓缩处理,从而得到浓缩液;将所述浓缩液进行阳离子交换柱层析,分离出百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA);任选地,将在步骤2)中得到的流穿液进行多结合性阴离子交换层析,分离出百日咳粘着素(Prn),或者将百日咳杆菌菌体溶解、浓缩,并进行硫酸铵沉淀和多结合性阴离子交换层析,分离出百日咳粘着素(Prn);将PT单独制成无细胞百日咳疫苗,或者将PT同FHA和/或Prn混合在一起制成无细胞百日咳疫苗。
- 一种兔波氏杆菌外膜蛋白及其制备方法和用途-201910157274.4
- 刘燕;鲍国连;韦强;肖琛闻;季权安;黄叶娥;李科 - 浙江省农业科学院
- 2019-03-01 - 2019-06-14 - C07K14/235
- 本发明公开了一种兔波氏杆菌外膜蛋白及其制备方法和用途,该外膜蛋白为外膜蛋白PPP或外膜蛋白PL,所述外膜蛋白PPP包含:如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列,所述外膜蛋白PL包含:如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。本发明的兔波氏杆菌外膜蛋白能够用于包被ELISA酶标板,作为检测抗原,用于检测兔波氏杆菌抗体,仅需要2个小时就能测得结果,且检测灵敏度、准确度高,本发明试剂盒便于操作、使用成本低、稳定性和重复性好,适合大规模推广应用。
- 苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种组合制剂-201680005981.6
- B·N·德维斯泰;S·多哈德;F·马莫 - 瓦伦特生物科学有限责任公司
- 2016-01-15 - 2017-12-01 - C07K14/235
- 本发明大体上涉及包含高效力苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)菌株和苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis subsp.aizawai)菌株的农业制剂,其中苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种与苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种的重量比率为约2080到8020。本发明还涉及制造本发明的制剂和使用所述制剂来有效防治作物害虫的方法。
- 一种兔支气管败血波氏杆菌基因工程亚单位疫苗-201710031421.4
- 张恒;张会;范根成;杜元钊 - 青岛易邦生物工程有限公司
- 2017-01-17 - 2017-04-26 - C07K14/235
- 本发明提供一种兔支气管败血波氏杆菌基因工程亚单位疫苗,其中抗原的氨基酸序列为SEQ ID NO1。本发明通过对兔支气管败血波氏杆菌QDBb01株主要保护性抗原蛋白基因PPP的PCR扩增,利用PET32a(+)表达性载体构建了能表达兔支气管败血波氏杆菌主要保护性抗原蛋白PPP的基因工程重组大肠杆菌BL21宿主菌。经SDS‑PAGE分析,表达出了46.2kDa重组融合目的蛋白。将融合蛋白纯化并复性后制备成基因工程亚单位氢氧化铝胶疫苗。将该亚单位苗按照1.0ml/只剂量皮下注射免疫体重1.5kg左右的家兔,免后14日,用兔支气管败血波氏杆菌QDBb01株按照100LD50进行攻毒,保护率为10/10。
- 具有活细菌分离物的用于全身施用的疫苗-201180061881.2
- K.A.奥康内尔;R.拉夫勒尔;G.J.胡查帕;T.L.瓦斯莫恩 - 英特维特国际股份有限公司
- 2011-12-21 - 2016-10-26 - C07K14/235
- 本发明涉及包含活的aro突变细菌、佐剂、芳香族添加剂、或佐剂和芳香族添加剂二者的适于全身施用的疫苗。本发明还涉及该疫苗的制造和通过施用该疫苗而保护动物的方法。
- 一种百日咳抗原的分离纯化方法-201510595876.X
- 张俊;李国顺;徐兴军;刘建凯 - 北京民海生物科技有限公司
- 2015-09-17 - 2015-12-23 - C07K14/235
- 本发明提供一种百日咳抗原的分离纯化方法,采用硅藻土、羟基磷灰石作为柱层析材料,百日咳杆菌发酵液经浓缩调整电导处理后,经硅藻土富集百日咳抗原,再经羟基磷灰石纯化后得到百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)。经SDS-PAGE电泳检测,PT蛋白和FHA蛋白纯度均高于95%。本发明方法操作简单,抗原的纯度高,不仅大幅度降低生产成本而且显著提高产品的质量和收率,是一种简单、快速的百日咳抗原的分离纯化方法,取得良好的经济效益,具备优异的市场应用前景。
- 一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法-201410516960.3
- 陈道远;吴强;马礼耕;伍长华;李建霖 - 成都欧林生物科技股份有限公司
- 2014-09-30 - 2015-01-28 - C07K14/235
- 本发明公开了一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法,它包括:S1.样品处理:百日咳杆菌培养结束后去除菌体、收集上清液,上清液用超滤膜包浓缩;S2.一次层析:包括洗脱杂蛋白、分离百日咳毒素和分离纯化丝状血凝素;S3.二次层析:将分离的百日咳毒素粗制品上样于CaptoMMC层析柱,缓冲液洗脱,收集OD280洗脱峰处的洗脱液,即为纯化的百日咳毒素。本发明采用CaptoSPImpRes层析柱、CaptoMMC层析柱对百日咳杆菌培养液的上清液进行分离纯化,可精确得到PT和FHA,质量可控,分离纯化百日咳抗原蛋白的纯度达95%以上,该方法具有操作简单、纯化速度快、成本低的优点。
- 一种分离纯化百日咳杆菌粘附素的方法-201410516831.4
- 陈道远;吴强;马礼耕;伍长华;陈克平 - 成都欧林生物科技股份有限公司
- 2014-09-30 - 2015-01-07 - C07K14/235
- 本发明公开了一种分离纯化百日咳杆菌粘附素的方法,它包括以下步骤:样品处理:S1.收集百日咳杆菌菌体,菌体经重悬、浸提、离心去除沉淀,将上清液超滤浓缩并调pH值到7.0;S2.一次洗脱:上清液上样于CaptoAdhere层析柱上,用缓冲液洗脱,收集洗脱液;S3.透析:洗脱液在pH4.5~5.5、15~25mM NaAc溶液中进行透析脱盐,得透析液;S4.二次洗脱:透析液上样于CaptoSPImRes层析柱,洗脱并收集洗脱液即为纯化的百日咳杆菌粘附素。本发明采用CaptoAdhere层析柱、CaptoSPImRes层析柱对百日咳杆菌培养液的菌体进行分离纯化,所得抗原蛋白百日咳杆菌粘附素成分明确、质量可控,纯化方法具有操作简单、纯化速度快、成本低的优点。
- 百日咳杆菌69KD外膜蛋白的纯化方法-201210027545.2
- 肖詹蓉;王玲 - 北京天坛生物制品股份有限公司
- 2012-02-08 - 2012-07-18 - C07K14/235
- 本发明属于蛋白分离纯化领域,涉及百日咳杆菌的69KD外膜蛋白的工业化大规模分离纯化方法。所述方法包括:a.将百日咳杆菌CS菌体用含1mol/L至2mol/L氯化钠的pH8.8的缓冲液在40至60℃浸提30分钟至3小时,离心,收集上清,得到含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清;b.在含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到15%重量/体积至25%重量/体积,静置1小时至8小时,离心,收集上清;c.在步骤b收集的上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到30%重量/体积至38%重量/体积,静置1小时至8小时,离心,弃上清,收集沉淀;d.以Tris-HCl缓冲液溶解步骤c中收集的沉淀并透析除去硫酸铵;e.过DEAE sepharose离子交换柱,用线性梯度氯化钠浓度从0mol/L至1mol/L的缓冲液洗脱,收集目的蛋白。本发明的方法可以快速、简便、低成本纯化天然构象69KD外膜蛋白,从而可用于大规模工业制备天然构象69KD外膜蛋白。
- 基于LPS糖基转移酶突变体的改进的抗百日咳博德特氏菌疫苗-200880017600.1
- J·J·G·戈尔特森;J·P·M·托马森;P·A·范德莱 - 由卫生福利和体育大臣代表的荷兰王国
- 2008-03-25 - 2010-08-11 - C07K14/235
- 本发明涉及改进的百日咳疫苗,其中使用具有改变的LPS分子的百日咳博德特氏菌突变体或可由其获得的LPS分子。这些突变体或所述可获得的LPS分子可进一步用作佐剂。
- 包含或缺乏CD11b/CD18相互作用结构域的修饰的博德特氏菌腺苷酸环化酶及其用途-200480023810.3
- 克洛德·勒克莱尔;穆罕默德·阿扎米伊德里西;达尼埃尔·拉当;塞西尔·包切;彼得·塞伯;伊日娜·劳茨卡;拉迪姆·奥西斯卡 - 巴斯德研究院;国立科学研究中心
- 2004-06-18 - 2006-09-27 - C07K14/235
- 本发明涉及修饰的博德特氏菌腺苷酸环化酶毒素,其在结合CD11b/CD18方面具有缺陷,还涉及其在制备用于治疗百日咳和/或用于预防博德特氏菌感染的药物组合物中的用途。本发明还涉及博德特氏菌腺苷酸环化酶的特异性片段,其包含CD11b/CD18相互作用结构域,并涉及其用途,特别是用于将感兴趣的分子导向表达CD11b的细胞。
- 专利分类