[发明专利]一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法

摘要

本发明公开了一种血管紧张素转化酶的抑制肽，其特征在于以长蛇鲻鱼肉蛋白为原料，采用枯草芽孢杆菌1398产生的中性蛋白酶水解，经超滤、凝胶分离、反相高效液相分离得到。该抑制肽的氨基酸序列为：Ser-Pro-His-Tyr-Arg，抑制肽的制备包括以下步骤：(1)长蛇鲻鱼肉蛋白粉中性蛋白酶水解；(2)用超滤膜将酶解液超滤，对超滤透过液通过凝胶层析柱进行分离纯化；(3)采用高效反相液相色谱对纯化液进行二次分离，其中第一次分离以水和乙腈为流动相，第二次采用洗脱梯度分离，最后对抑制效果最好吸收峰流出液冷冻干燥即得血管紧张素转化酶抑制肽。本发明制备抑制肽的原料来源广泛，制备方法简单，具有较强的适用性。

主权项

一种制备长蛇鲻鱼肉蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的方法，其特征在于以长蛇鲻鱼肉蛋白为原料，采用枯草芽孢杆菌1398所产生的中性蛋白酶水解，具体工艺为：(1)往长蛇鲻鱼肉蛋白粉加水制成蛋白含量为2～5％的反应原料液；然后往反应原料液中，加入0.5～5％中性蛋白酶，在35～55℃及pH为6.0～7.5下水解2小时，最后加热至100℃灭酶5～20min得到酶解液；(2)用分子量为5000Da的超滤膜将酶解液超滤，对超滤透过液以水为流动相通过Sephedex G‑15凝胶层析柱进行分离，层析柱流出液用蛋白核酸检测仪在220nm处进行进行检测，根据检测谱图(见图1)收集3号吸收峰的流出液得到纯化液；(3)以C18为色谱柱、水和乙腈为流动相以及220nm检测波长二极管阵列检测器监测，采用高效反相液相色谱对纯化液进行二次分离，其中第一次分离以流动相水和乙腈比例为95∶5‑50∶50，流速0.5mL·min‑1，根据检测谱图(见图2)收集7号吸收峰的流出液；第二次对7号吸收峰流出液进行洗脱梯度分离，第一阶段的流动相水和乙腈比例为95∶5‑80∶20，维持时间为8min，第二阶段的流动相水和乙腈比例为80∶20‑70∶30，维持时间为16min，二阶段流动相的流速均0.5mL·min‑1，根据检测谱图(见图3)收集2号吸收峰的流出液；最后对2号吸收峰流出液冷冻干燥即得血管紧张素转化酶抑制肽；所述长蛇鲻鱼肉蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的氨基酸序列为Ser‑Pro‑His‑Tyr‑Arg(丝氨酸‑脯氨酸‑组氨酸‑酪氨酸‑精氨酸)。