[发明专利]一种血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法

权利要求书

1.一种制备长蛇鲻鱼肉蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的方法，其特征在于以长蛇鲻鱼肉蛋白为原料，采用枯草芽孢杆菌1398所产生的中性蛋白酶水解，具体工艺为：

(1)往长蛇鲻鱼肉蛋白粉加水制成蛋白含量为2～5％的反应原料液；然后往反应原料液中，加入0.5～5％中性蛋白酶，在35～55℃及pH为6.0～7.5下水解2小时，最后加热至100℃灭酶5～20min得到酶解液；

(2)用分子量为5000Da的超滤膜将酶解液超滤，对超滤透过液以水为流动相通过Sephedex G-15凝胶层析柱进行分离，层析柱流出液用蛋白核酸检测仪在220nm处进行进行检测，根据检测谱图(见图1)收集3号吸收峰的流出液得到纯化液；

(3)以C18为色谱柱、水和乙腈为流动相以及220nm检测波长二极管阵列检测器监测，采用高效反相液相色谱对纯化液进行二次分离，其中第一次分离以流动相水和乙腈比例为95∶5-50∶50，流速0.5mL·min^-1，根据检测谱图(见图2)收集7号吸收峰的流出液；第二次对7号吸收峰流出液进行洗脱梯度分离，第一阶段的流动相水和乙腈比例为95∶5-80∶20，维持时间为8min，第二阶段的流动相水和乙腈比例为80∶20-70∶30，维持时间为16min，二阶段流动相的流速均0.5mL·min^-1，根据检测谱图(见图3)收集2号吸收峰的流出液；最后对2号吸收峰流出液冷冻干燥即得血管紧张素转化酶抑制肽；

所述长蛇鲻鱼肉蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的氨基酸序列为Ser-Pro-His-Tyr-Arg(丝氨酸-脯氨酸-组氨酸-酪氨酸-精氨酸)。