[发明专利]一种可以同时检测六种治病微生物的悬浮芯片检测方法

摘要

本发明公开了一种可同时检测六种致病菌的悬浮芯片方法，所述方法包括：从Gene bank上下载大肠杆菌O157:H7、志贺氏菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单核增生李斯特菌特有基因序列，设计相应的引物、探针，采用液态悬浮杂交方法，把特异性的核酸探针共价结合到用彩色荧光编码的微球表面。生物素标记扩增产物，杂交到与它互补的探针序列，通过结合的链霉亲和素藻红蛋白，检测目标物，实验证明所设计探针没有交叉反应，单通道检测检出限达到8nM，多通道检测的检出限为1.6nM，实际样品单通道检出限在10-4000CFU/mL，多通道检出限为100CFU/mL。

主权项

一种可以同时检测六种治病微生物的悬浮芯片检测方法，其中包括针对六种致病菌特有基因分别设计的引物，下游引物末端使用生物素标记，根据PCR扩增区内核酸序列设计特异性捕获探针，探针末端氨基C12修饰；所设计探针分别与Luminex编码微球偶联，偶联探针后的微球在一定条件下可以特异性地捕获生物素化的PCR产物，通过结合的链霉亲和素藻红蛋白，经Luminex检测仪，每个微球可同时被两束激光检测到，红色激光激发微球基质中的颜色，可根据微球的光谱地址而定性；而绿色激光则激发结合在待测样本上的链霉亲和素藻红蛋白进行定量。最后，通过软件，可以自动统计分析得出特定微球上的平均荧光强度。