[发明专利]一种检测水稻线粒体组型的SRAP分子标记方法

摘要

本发明公开了一种检测水稻线粒体组型的SRAP分子标记方法，其步骤是：：首先是SRAP标记引物设计及其特征参数；其次是PCR扩增体系的建立；选择水稻细胞质雄性不育系材料，生长至两叶一心时，材料取幼苗在液氮中研磨成粉状提取总DNA；第三是PCR扩增体系的建立：标准的PCR扩增反应体系为25µl；第四是线粒体组型分子检测结果的统计分析。本发明以水稻线粒体基因组遗传变异为基础，通过对线粒体重复序列区的广泛筛选，建立了一套多态性丰富、检测灵敏的分子标记。快速、准确地通过实验手段检测水稻品种和种质资源。方法操作简便、稳定可靠，可用于不同细胞质雄性不育系鉴定和水稻品种的鉴定，具有准确、高效、快速的特点，提高了不育系和新品种鉴定的效率。

主权项

1.一种检测水稻线粒体组型的SRAP分子标记方法，其步骤是：A、线粒体SRAP分子标记PCR引物及其参数：B、PCR扩增体系的建立：选择水稻细胞质雄性不育系材料：为合系41A、冈46A、II-32A、协青早A、马协A、K17A、楚粳23A、包原A、珍汕97A和粤泰A，生长至两叶一心时，每个材料取幼苗2克在液氮中研磨成粉状提取总DNA；C、PCR扩增体系的建立：标准的PCR扩增反应体系为25μl，组成如下：50ng/μl总DNA 1μl，10×PCR buffer/pH8.3 2.5μl，25mM MgCl₂ 1μl，25μMdNTP 1μl，1U/μl Taq酶 1μl，5pM的引物F 1μl，5pM的引物R 1μl，去离子无菌水16.5μl，反应混合物用矿物油或石腊油覆盖，PCR程序如下：1cycle：94℃ 5min30cycle：94℃ 1min，48～55℃ 1min，72℃ 1min1cycle：72℃ 5minstore：4℃；D、线粒体DNA扩增带型统计分析：(1)扩增均以清水为阴性对照，只有当阴性对照扩增无任何带型，说明PCR结果可靠；(2)统计被检测材料的扩增带，阴性计为0，阳性计为1，然后统计、聚类分析；(3)线粒体组型的确定：当两个材料的扩增带型完全一致时，两个材料具有相同的线粒体组型，它们具有相同的母本来源；这两个材料具有不同的线粒体组型，具有不同的母本起源。