[发明专利]一种碱性果胶酶pel168s核苷酸优化序列及其高效表达方法有效
| 申请号： | 201110379664.X | 申请日： | 2011-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN102604977A | 公开（公告）日： | 2012-07-25 |
| 发明（设计）人： | 张桂敏;张成杰;马延和 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/10;C12N15/81;C12N9/26;C12R1/84;C12R1/125 |
| 代理公司： | 武汉金堂专利事务所 42212 | 代理人： | 丁齐旭 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提出并公开了一种碱性果胶酶pel168s核苷酸优化序列及其高效表达方法，它是使用DNAworks软件，将pel168基因序列(Bacillus subtilis 168，GenBank登录号：AL009126)进行优化，屏蔽了限制性酶切位点SalI、PmeI，在其引物3’端添加了EcoRI限制性酶切位点，引物5’端引入了NotI限制性酶切位点。经PCR扩增，连接转化，测序验证，得到碱性果胶酶pel168s的优化基因序列。用该序列构建重组质粒pel168s-9k，并转入毕赤酵母GS115中，得阳性重组菌株GS115/pel168s-9k。发酵培养阳性重组菌株，可制备得到所述耐热碱性果胶酶蛋白质。使用本发明碱性果胶酶pel168s核苷酸优化序列利用毕赤酵母生产碱性果胶酶，目的蛋白表达量高，纯化过程简单，极大的降低了碱性果胶酶的生产成本，增加了企业对其的利用率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 碱性 果胶酶 pel168s 核苷酸 优化 序列 及其 高效 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种碱性果胶酶pel168s核苷酸优化序列，其特征在于优化后的pel168s序列与原始序列pel168相比，序列中的15％‑25％的碱基被优化且其中的毕赤酵母低频密码子均被高频或次高频密码子所替换，序列中除去了21个氨基酸的信号肽，整个序列不含有SalI、PmeI限制性酶切位点。
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