[发明专利]一种大豆分离蛋白酶解产物中的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法

摘要

一种大豆分离蛋白酶解产物中的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明涉及采用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白，得到一种天冬氨酸蛋白酶抑制剂粗品。该粗品继续采用将酶解液进行热处理，高速离心，上清液经DEAE-52离子交换层析分离得到天冬氨酸蛋白酶抑制剂，再经真空冷冻干燥得天冬氨酸蛋白酶抑制剂干粉。本发明所制备的天冬氨酸蛋白酶抑制剂对天冬氨酸蛋白酶家族中胃蛋白酶、凝乳酶有较高的抑制活性，从酶解后的大豆分离蛋白这种天然植物类加工材料中提取的天冬氨酸蛋白酶抑制剂不仅具备特异性较好、稳定性好、且应用相对安全，在医药保健、食品添加剂及病虫害防治等领域都会有广泛的应用前景。

主权项

一种大豆分离蛋白酶解产物中的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，其特征为：采用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白，将酶解液进行热处理，高速离心，上清液经DEAE‑52离子交换层析得纯化的天冬氨酸蛋白酶抑制剂，再经真空冷冻干燥得天冬氨酸蛋白酶抑制剂干粉；其工艺为：A 筛选酶类优化酶解条件：（1）大豆分离蛋白：市售；（2）酶解：配置质量浓度5%的大豆分离蛋白溶液100 mL，分别用相同酶活单位的木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶在各自最适温度、pH条件下酶解相同的时间，研究酶解产物对胃蛋白酶的抑制活性，确定选用木瓜蛋白酶；（3）木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白：确定木瓜蛋白酶为酶解大豆分离蛋白的最适蛋白酶，酶解条件为：每克大豆分离蛋白加入的木瓜蛋白酶量为8000U，pH 6.5，55℃下水浴酶解60 min；B大豆分离蛋白酶解后上清液的制备：（4）高速离心：将酶解液以8000 r/min、4℃下离心30 min，取上清液；（5）热处理：将上清液进行70℃下水浴20 min，8000 r/min离心30 min，取上清；C天冬氨酸蛋白酶抑制剂的分离制备：（6）离子交换层析：DEAE‑52离子交换色谱柱规格为30 cm×2.2 cm，平衡缓冲液为pH 6.8、10 mmol/L的磷酸钠缓冲液；洗脱模式：以平衡缓冲液洗脱2 倍柱体积后，再以平衡缓冲液依次分别加含有不同浓度 0.2、0.4、0.6、0.8 mol/L NaCl的磷酸缓冲液进行阶段洗脱，流速为1.5 mL/min，进样量为20 mL，280 nm波长紫外检测；（7）干燥成粉：采用真空冷冻干燥的方法将DEAE‑52 离子交换层析中以含0.2 mol/L NaCl的磷酸缓冲液梯度洗脱下收集的峰液进行冷冻干燥，即为天冬氨酸蛋白酶抑制剂干粉。