[发明专利]麻疹长-47株制备二倍体细胞减毒活疫苗及制备工艺

摘要

本发明公开麻疹长-47株制备二倍体细胞减毒活疫苗及制备工艺，用二倍体细胞株制备麻疹减毒活疫苗，病毒培养容器为细胞工厂，可连续三次收获病毒液，并以浓缩液形式保存。并通过了猴体神经毒力试验及安全性试验。此技术属于对麻疹减毒活疫苗生产的重大改革，对麻疹减毒活疫苗的生产质量有着质的飞跃。解决用鸡胚（CEC）生产存在外源因子污染和一小部分人存在过敏反应的可能及解决了生产效率和质量不高的问题。

主权项

一种麻疹长‑47株制备二倍体细胞减毒活疫苗制备工艺，包括以下步骤：1）将人胚肺二倍体细胞按1：2—1：4比例传代至细胞工厂，E‑MEM培养液的pH为7.2~7.6、牛血清含量为10~15%（ml/ml）、浓度为3%的谷氨酰胺含量为1%，加入量为每层细胞工厂体积的30~40%；同时，以长‑47株麻疹病毒1：（100~1000）的感染复数加入细胞工厂中，33℃培养细胞及病毒；2）当细胞出现50~60%病变时，弃去细胞工厂内的液体，以培养液2‑3倍的HanKs′液或PBS液清洗细胞表面，充分振摇后排空洗液；加入199疫苗液，加入量为每层细胞工厂体积的25~40%，33℃继续培养；收获病毒液，重复三次；3）将三次收获的病毒液保存于（2~8）℃，待无菌试验合格后，将病毒液通过0.65μm孔径的中空纤维滤柱进行过滤澄清，以孔径为300k的超滤膜浓缩5~10倍，保存于（2~8）℃或（‑25~‑20）℃。