[发明专利]麻疹长-47株制备二倍体细胞减毒活疫苗及制备工艺

权利要求书

1.一种麻疹长-47株制备二倍体细胞减毒活疫苗制备工艺，包括以下步骤：

1）将人胚肺二倍体细胞按1：2—1：4比例传代至细胞工厂，E-MEM培养液的pH为7.2~7.6、牛血清含量为10~15%（ml/ml）、浓度为3%的谷氨酰胺含量为1%，加入量为每层细胞工厂体积的30~40%；同时，以长-47株麻疹病毒1：（100~1000）的感染复数加入细胞工厂中，33℃培养细胞及病毒；

2）当细胞出现50~60%病变时，弃去细胞工厂内的液体，以培养液2-3倍的HanKs′液或PBS液清洗细胞表面，充分振摇后排空洗液；加入199疫苗液，加入量为每层细胞工厂体积的25~40%，33℃继续培养；收获病毒液，重复三次；

3）将三次收获的病毒液保存于（2~8）℃，待无菌试验合格后，将病毒液通过0.65μm孔径的中空纤维滤柱进行过滤澄清，以孔径为300k的超滤膜浓缩5~10倍，保存于（2~8）℃或（-25~-20）℃。

2. 一种麻疹长-47株制备二倍体细胞减毒活疫苗制备工艺，包括以下步骤：

1）将人胚肺二倍体细胞按1：2—1：4比例传代传至细胞工厂，E-MEM培养液的pH为7.2~7.6、牛血清含量为10~15%（ml/ml）、浓度为3%的谷氨酰胺含量为1%，加入量为每层细胞工厂体积的30~40%；37℃培养3-5天，对人胚肺二倍体细胞进行传代；

2）以长-47株麻疹病毒1：（100~1000）的感染复数感染人胚肺二倍体细胞，所用维持液E-MEM培养液的pH为7.4~7.6、牛血清含量为2~3%（ml/ml）、浓度为3%的谷氨酰胺含量为1%，加入量为每层细胞工厂体积的30~40%；

3）当细胞出现50~60%病变时，弃去细胞工厂内的液体，以培养液2-3倍的HanKs′液或PBS液清洗细胞表面，充分振摇后排空洗液；加入199疫苗液，加入量为每层细胞工厂体积的25~40%，33℃继续培养；当细胞病变出现75%开始进行收获病毒液，重复三次；

4）将三次收获的病毒液保存于（2~8）℃，待无菌试验合格后，将病毒液通过0.65μm孔径的中空纤维滤柱进行过滤澄清，以孔径为300k的超滤膜浓缩5~10倍，保存于（2~8）℃或（-25~-20）℃。

3. 权利要求1或2所述的麻疹长-47株制备二倍体细胞减毒活疫苗制备工艺，其特征在于：所述的人胚肺二倍体细胞选自：2BS株或KMB-17或MRC-5。