[发明专利]一种公牛冻精基因组DNA的提取方法

摘要

本发明提供了一种公牛冻精基因组DNA的提取方法，其包括公牛精子的清洗、精子的裂解和消化以及基因组DNA的纯化步骤，本发明通过改进消化裂解液成分和配比，确定适宜的消化时间，提高了公牛精子DNA的消化产率；同时摒弃原有的有机溶剂抽提的纯化方法，采用比较简单的高盐法进行DNA纯化，使用的试剂易于配制，成本低，能有效去除杂质，获得产率高、质量好的冻精基因组，适合冻精基因组DNA的高效和批量获取。

主权项

一种公牛冻精基因组DNA的提取方法，包括精子细胞的清洗、精子的裂解和消化以及DNA的纯化步骤，其特征在于，精子的裂解和消化步骤为：向清洗后的精子细胞沉淀中加入冻精原液2～3倍体积的精子细胞裂解液和20w/v％SDS，静置后涡旋混匀，然后向混合体系中加入蛋白酶K，混匀，过夜消化；其中，所述精子细胞裂解液的配方为：pH值8.0的EDTA 0.010‑0.0125mol/L，pH值8.0的Tris·Cl 0.01‑0.0125mol/L，SDS 1％‑1.25％，NaCl 2.9‑3.625g/L，DTT9.6‑19.3g/L，以蒸馏水配制；基因组DNA的纯化步骤为：向上述消化体系中加入该消化体系总体积0.4～0.6倍的饱和食盐水，混匀后静置5‑10min，离心，转移上清，并用无水乙醇沉淀上清液，离心后，洗涤沉淀，最后将沉淀溶于蒸馏水中，‑20℃保存。