[发明专利]一种公牛冻精基因组DNA的提取方法

权利要求书

1.一种公牛冻精基因组DNA的提取方法，包括精子细胞的清洗、精子的裂解和消化以及DNA的纯化步骤，其特征在于，

精子的裂解和消化步骤为：向清洗后的精子细胞沉淀中加入冻精原液2～3倍体积的精子细胞裂解液和20w/v％SDS，静置后涡旋混匀，然后向混合体系中加入蛋白酶K，混匀，过夜消化；其中，所述精子细胞裂解液的配方为：pH值8.0的EDTA 0.010-0.0125mol/L，pH值8.0的Tris·Cl 0.01-0.0125mol/L，SDS 1％-1.25％，NaCl 2.9-3.625g/L，DTT9.6-19.3g/L，以蒸馏水配制；

基因组DNA的纯化步骤为：向上述消化体系中加入该消化体系总体积0.4～0.6倍的饱和食盐水，混匀后静置5-10min，离心，转移上清，并用无水乙醇沉淀上清液，离心后，洗涤沉淀，最后将沉淀溶于蒸馏水中，-20℃保存。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述精子细胞裂解液的配方为：pH值8.0的EDTA 0.0125mol/L，pH值8.0的Tris·Cl0.0125mol/L，SDS 1.25％，NaCl 3.625g/L，DTT 9.625g/L，以蒸馏水配制。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，精子的裂解和消化步骤为：向清洗后的精子细胞沉淀中加入冻精原液2倍体积的精子细胞裂解液和冻精原液0.5倍体积的20w/v％SDS，静置后涡旋混匀，然后向混合体系中加入蛋白酶K，使体系中蛋白酶K浓度达到0.4mg/mL，混匀，过夜消化。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，基因组DNA的纯化步骤中是向精子细胞的消化体系中加入该消化体系总体积0.6倍的饱和食盐水。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，公牛精子的清洗步骤为：将冻精置于离心管中，加入生理盐水，涡旋混匀，离心，得沉淀。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的公牛冻精为荷斯坦公牛冻精。

7.公牛冻精基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，其包括：

试剂I：pH值8.0的EDTA 0.010-0.0125mol/L，pH值8.0的Tris·Cl0.01-0.0125mol/L，SDS 1％-1.25％，NaCl 2.9-3.625g/L，DTT9.6-19.3g/L，以蒸馏水配制；

试剂II：饱和食盐水。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，其还包括：

试剂III：生理盐水；

试剂IV：20w/v％SDS；

试剂V：蛋白酶K。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，其包括：

试剂I：pH值8.0的EDTA 0.0125mol/L，pH值8.0的Tris·Cl0.0125mol/L，SDS 1.25％，NaCl 3.625g/L，DTT 9.625g/L，以蒸馏水配制；

试剂II：饱和食盐水；

试剂III：生理盐水；

试剂IV：20w/v％SDS；

试剂V：蛋白酶K。

10.权利要求7-9任一项所述的试剂盒在提取荷斯坦公牛冻精基因组DNA中的应用。