[发明专利]一种沙漠植物准噶尔无叶豆实时荧光定量PCR内参分子的筛选方法

摘要

本发明涉及一种沙漠植物准噶尔无叶豆实时荧光定量PCR内参分子的筛选方法，该方法利用同源克隆对准噶尔无叶豆中的8个内参基因进行了克隆，并设计实时荧光定量PCR的内参基因特异引物，选取受10种非生物胁迫和没有胁迫(对照)的两周大幼苗为实验材料进行荧光定量PCR实验验证，运用geNorm软件进行荧光定量数据的分析，从而筛选出准噶尔无叶豆幼苗开展各种非生物胁迫下荧光定量研究的最适合，最稳定的内参分子是EF和α-tubulin。用本发明所述方法可避免不同非生物胁迫下的准噶尔无叶豆幼苗材料在RNA质量，产量及反转录效率等上的存在的误差，能更好的对实时荧光定量检测的数据进行校正和标准化，提高了研究的准确性和可靠性。

主权项

一种沙漠植物准噶尔无叶豆实时荧光定量PCR内参分子的筛选方法，其特征在于按下列步骤进行：a、利用同源克隆的方法对准噶尔无叶豆幼苗中8个内参候选基因进行了克隆，并以这些序列为基础设计了9对实时荧光定量PCR的内参基因引物；b、分别选取干旱，高盐，冷，热，脱落酸，氧化胁迫，机械损伤，重金属胁迫为硫酸铜、硫酸锌胁迫和紫外胁迫共10种非生物胁迫以及无胁迫处理的的准噶尔无叶豆叶片为实验材料，进行荧光定量PCR实验；c、将实时荧光定量PCR得到的数据导入geNorm软件进行内参稳定性和内参数目分析，筛选出内参分子和内参分子组合；d、选取干旱胁迫下的准噶尔无叶豆叶片，以准噶尔无叶豆中的脱水响应元件结合蛋白基因为目的基因，用实时荧光定量PCR和geNorm软件筛选出来的内参分子来探讨DREB基因在干旱胁迫下的表达规律。