[发明专利]一种筛选细胞纺锤体检验点抑制剂的方法

摘要

一种筛选细胞纺锤体检验点抑制剂的方法，涉及一种纺锤体检验点抑制物。以Hela细胞为模型，根据纺锤体检验点在细胞分裂中的作用机制，利用有丝分裂细胞与间期细胞有着不同粘着力的特性，利用MTT的实验原理，借助一个已知的阳性纺锤体检验点抑制物(12W)验证这个筛选方法的可靠性，建立一个灵敏、易于操作、低成本的可用于高通量筛选纺锤体检验点抑制物的方法。有助于开发具有疗效显著且毒副作用低的纺锤体检验点抑制物。

主权项

一种筛选细胞纺锤体检验点抑制剂的方法，其特征在于包括以下步骤：1)将Hela细胞置于细胞培养皿上在培养液中培养；2)当细胞密度达到80％～90％时，加入诺考达唑处理，收集从培养板上脱落的有丝分裂细胞并将其转移到96孔板或384孔板上；3)随后加入待测化合物，阴性对照组加入细胞培养液，培养；4)洗去未贴壁细胞，加入细胞培养液反应；5)去掉细胞培养液，加入二甲基亚砜，溶解步骤4)中形成的甲瓒结晶，再检测OD570读值；6)当待测化合物所对应孔的OD570与阴性对照孔的OD570之间比值大于2时，该待测化合物可被认为是潜在的纺锤体检验点抑制物；7)进行第二轮筛选，以排除潜在的纺锤体检验点抑制物中的假阳性，其具体方法是重复上述步骤1)和2)，并在原步骤2)中多加入终浓度为10～20uM的MG132；8)加入从步骤6)中筛选出来的潜在纺锤体检验点抑制物，阴性对照孔加入等量的DMEM细胞培养液培养；9)重复上述步骤4)和5)；10)潜在的纺锤体检验点抑制物所对应孔的OD570与阴性对照孔的OD570之间比值在0.6～1.2之间，该化合物可被认为是纺锤体检验点抑制物，可被用于做进一步的分析。