[发明专利]全基因组mRNA3′末端基因文库的构建方法有效
| 申请号： | 201110062417.7 | 申请日： | 2011-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN102181527A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 徐安龙;付永贵;孙雨;李宇新;万谅;饶兴蔷 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C40B50/06;C40B40/06 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适用于高通量测序的全基因组mRNA3′末端文库的制备方法，通过模板转换合成cDNA一链及PCR引入突变，获取全基因组mRNA3′非翻译区DNA序列。本发明全基因组mRNA3′末端文库的制备方法制得的文库数据产出量大，样品准备步骤简便、经济，便于后期生物信息学分析，易于大规模应用。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组 mrna3 末端 基因 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种全基因组mRNA 3’末端基因文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(a) 将基因组的核酸采用DNase消化；(b) 将消化后的总RNA高温94‑95℃加热，随机片段化至约200‑500bp的片段； (c) 利用模板转换技术进行反转录反应合成cDNA第一链，所述的cDNA第一链的两端连有高通量测序引物； (d) 利用在cDNA第一链两端接上的测序引物通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增；(e) PCR产物用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，选择200‑300bp或300‑500bp的大小进行回收，得到目的片段。
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