[发明专利]普洱茶微生物菌群中的优势细菌及其谱图

摘要

本发明涉及一种普洱茶渥堆发酵过程中优势细菌菌群结构的分子鉴定方法，包括以下步骤：1)取渥堆发酵过程中不同翻堆次数和位置的普洱茶作为待测样品；2)提取待测样品的总DNA，并对其进行纯化；3)以待测样品的总DNA为模板，在专用引物的引导下进行PCR扩增，扩增结束后，对目的片段进行回收及纯化；4)对纯化的目的片段进行变性梯度凝胶电泳，染色后得到DGGE指纹图谱；5)从凝胶中回收优势条带，并以此为模板，在上游引物338F和下游引物R518引导下进行PCR扩增，扩增结束后，对目的片段进行回收，纯化及测序；6)步骤5的测序结果和标准菌群的序列进行比对，确定渥堆发酵普洱茶的优势细菌菌群。

主权项

一种普洱茶渥堆发酵过程中优势细菌菌群结构的分子鉴定方法，包括以下步骤：1)取渥堆发酵过程中不同翻堆次数和位置的普洱茶作为待测样品；2)提取待测样品的总DNA，并对其进行纯化；3)以待测样品的总DNA为模板，在专用引物——第一步扩增采用的引物为16s1：5′AGAGTTTGATCCTGGCTCAG‑3′和16s2：5′‑TACGGYTACCTTGTTACGACTT‑3′，第二步扩增采用的引物为：338fGC：5’‑CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGACTCCTACGGGAGGCAGCAG‑3’和R518：5’‑ATTACCGCGGCTGCTGG‑3’，的引导下进行PCR扩增，扩增结束后，对目的片段进行回收及纯化；4)对纯化的目的片段进行变性梯度凝胶电泳，染色后得到DGGE指纹图谱；5)从凝胶中回收优势条带，并以此为模板，在上游引物338F：5‘‑ACTCCTACGGGAGGCAGCAG‑3’；下游引物R518：5’ATTACCGCGGCTGCTGG‑3’，引导下进行PCR扩增，扩增结束后，对目的片段进行回收，纯化及测序；6)步骤5的测序结果和标准菌群的序列进行比对，确定渥堆发酵普洱茶的优势细菌菌群。