[发明专利]一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法

摘要

本发明涉及一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法，包括：(1)利用两条PCR引物对目的基因进行扩增；(2)将上述PCR产物自连转化感受态细胞后得到的质粒经限制性内切酶双酶切，回收小片段；(3)利用限制性内切酶双酶切pMBT-0质粒，并回收大片段，然后与上述小片段进行连接转化，得到pMSnf-S质粒。本发明简单，转换成C+1型或S+1型split intein后它仍具有剪接能力，具有较高通用性。

主权项

一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法，包括：(1)利用两条PCR引物对目的基因进行扩增；引物序列：上游引物为5’‑AAGTTAATCAACCATGGTGATGATGGTGATGACC‑3’，下游引物为5’‑AAGGAGGAAAAACATATGGGCAGTGGATCCGGTCTGCAA‑3’；或引物序列：上游引物为5’‑AAGTTAATCAATTAACATAAATTTCTGTATCGTG‑3’，下游引物为5’‑AAGGAGGAAAAACATATGGGTATGGTAATGGAAGCAGAA‑3’；(2)将上述PCR产物自连转化感受态细胞后得到的质粒经限制性内切酶双酶切，回收600‑700bp小片段；(3)利用限制性内切酶双酶切pMBT‑0质粒，并回收6000‑7000bp片段，然后与上述小片段进行连接转化，得到pMSnf‑S质粒。