[发明专利]一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法

权利要求书

1.一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法，包括：

(1)利用两条PCR引物对目的基因进行扩增；

引物序列：上游引物为5’-AAGTTAATCAACCATGGTGATGATGGTGATGACC-3’，下游引物为5’-AAGGAGGAAAAACATATGGGCAGTGGATCCGGTCTGCAA-3’；

或引物序列：上游引物为5’-AAGTTAATCAATTAACATAAATTTCTGTATCGTG-3’，下游引物为5’-AAGGAGGAAAAACATATGGGTATGGTAATGGAAGCAGAA-3’；

(2)将上述PCR产物自连转化感受态细胞后得到的质粒经限制性内切酶双酶切，回收600-700bp小片段；

(3)利用限制性内切酶双酶切pMBT-0质粒，并回收6000-7000bp片段，然后与上述小片段进行连接转化，得到pMSnf-S质粒。

2.根据权利要求1所述的一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)或(3)中的限制性内切酶为XhoI和AgeI，XhoI和AgeI的摩尔比为2∶1。

3.根据权利要求1所述的一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)中所使用的PCR方法为Inverse PCR。

4.根据权利要求1所述的一种T+1断裂蛋白质内含子的构建方法，其特征在于：所述步骤(3)中所使用的pMBT-0质粒，属pMAL载体。