[发明专利]一种酵母表达的牛乳铁蛋白衍生抗菌片段BLfA及其制备方法

摘要

本发明涉及的是一种基因工程抗菌蛋白的制备方法，具体地说是一种牛乳铁蛋白衍生抗菌片段BLfA的真核表达蛋白及其制备方法。从荷斯坦奶牛乳腺组织中克隆了BLfA编码基因并构建重组表达载体，实现其在毕赤酵母中表达，摇瓶和5升发酵罐最大表达量分别为485和499mg/L；利用透明颤菌血红蛋白VHb在宿主菌胞内与rBLfA共表达，表达量提高了23％，达613mg/L；rBLfA经亲和纯化，纯度为93.8％；铁结合实验表明，rBLfA的Fe3+结合能力为0.330，释放Fe3+的pH范围为7.0-3.5；rBLfA具有抑制金黄色葡萄球菌生长的功能，MIC为6.5μmol/L。

主权项

一种酵母表达的牛乳铁蛋白衍生抗菌片段BLfA，其特征是具有4个牛乳铁蛋白分子中最强的分子表面阳离子特性，其中牛乳铁蛋白衍生抗菌片段BLfA基因的核苷酸序列为：1      ATGGCCCCGAGGAAAAACGTTCGATGGTGTACCATCTCCCAACCTGAGTGGTTCAAATGC61     CGCCGATGGCAGTGGAGGATGAAGAAGCTGGGTGCTCCCTCTATCACCTGTGTGAGGAGG121    GCCTTTGCCTTGGAATGTATCCGGGCCATCGCGGAGAAAAAGGCGGATGCTGTGACCCTG181    GATGGTGGCATGGTGTTTGAGGCGGGCCGGGACCCCTACAAACTGCGGCCAGTAGCAGCA241    GAGATCTATGGGACGAAAGAGTCTCCCCAAACCCACTATTATGCTGTGGCCGTCGTGAAG301    AAGGGCAGCAACTTTCAGCTGGACCAGCTGCAAGGCCGGAAGTCCTGCCATACGGGCCTT361    GGCAGGTCCGCTGGGTGGATCATCCCTATGGGAATCCTTCGCCCGTACTTGAGCTGGACA421    GAGTCACTCGAGCCCCTCCAGGGAGCTGTGGCTAAATTCTTCTCTGCCAGCTGTGTTCCC481    TGCATTGATAGACAAGCATACCCCAACCTGTGTCAACTGTGCAAGGGGGAGGGGGAGAAC541    CAGTGTGCCTGCTCCTCCCGGGAACCATACTTCGGTTATTCTGGTGCCTTCAAGTGTCTG601    CAGGACGGGGCTGGAGACGTGGCTTTTGTTAAAGAGACGACAGTGTTTGAGAACTTGCCA661    GAGAAGGCTGACAGGGACCAGTATGAGCTTCTCTGCCTGAACAACAGTCGGGCGCCAGTG721    GATGCGTTCAAGGAGTGCCACCTGGCCCAGGTCCCTTCTCATGCTGTCGTGGCCCGAAGT781    GTGGATGGCAAGGAAGACTTGATCTGGAAGCTTCTCAGCAAGGCGCAGGAGAAATTTGGA841    AAAAACAAGTCTCGGAGCTTCCAGCTCTTTGGCTCTCCACCCGGCCAGAGGGACCTGCTG901    TTCAAAGACTCTGCTCTTGGGTTTTTGAGGATCCCCTCGAAGGTAGATTCGGCGCTGTAC961    CTGGGCTCCCGCTACTTGACCACCTTGAAGAACCTCAGGGAAACTGCGGAGGAGGTGAAG1021   GCGCGGTACACC