[发明专利]一种猪肉肌纤维类型组成的mRNA定量检测方法

摘要

本发明的目的在于提供一种建立在肌球蛋白重链不同亚型基因mRNA表达基础上的比组织化学染色法更为准确、可靠的猪肉肌纤维类型组成的定量分子检测方法。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种猪肉肌纤维类型组成的mRNA定量检测方法，其步骤包括引物与探针设计、总RNA提取与质量检测和cDNA第一链的合成，其特征在于：所述引物设计的探针是根据猪MyHC基因不同亚型cDNA上游序列差异合成TaqMan探针。通过上述技术方案，可以通过建立在肌球蛋白重链不同亚型基因mRNA表达基础上的猪肉肌纤维类型组成的定量分子检测方法比组织化学评定更为准确、可靠，本方法采用这种分子定量分型的方法，可以对不同品种猪不同部位肌肉中不同类型肌纤维进行定量测定及分析。

主权项

一种猪肉肌纤维类型组成的mRNA定量检测方法，包括引物与探针设计、总RNA提取与质量检测和cDNA第一链的合成，其特征在于：所述引物和探针是根据猪MyHC I、MyHC II a、MyHC II b和/或MyHC II x基因cDNA上游序列差异设计的，所述探针为TaqMan探针，所述的猪MyHC I基因参考序列GenBank登录号为“U75316”，其基因引物序列为5’ GGGAAAATCTGAACAAGCTGATGACTCTATTACCCCTGGAGACTTTGTCT 3’，其TaqMan探针为5’ TTGCGCTCCACACATC 3’，所述的猪MyHCII a基因参考序列GenBank登录号为“AB025260”，其基因引物序列为5’ CCAAGAAAGGTGGCAAGAAGAAGGGTCATCAGCTTGTTCAGATTCTCT 3’，其TaqMan探针为5’ CCGTGTCTGCCCTTTT 3’，所述的猪MyHC II b基因参考序列GenBank登录号为“AB025261”，其基因引物序列为5’ ACTTTGTGCGCTGCATCATCGGACGAGTTCGTGCTCCAT 3’，其TaqMan探针为5’ ATGAGACCAAAACTCC 3’，所述的猪MyHC II x基因参考序列GenBank登录号为“AB025262”，其基因引物序列为5’ CTTCACTGCGCAGCAGG GGACGAGTTCGTGCTCCAT 3’，其TaqMan探针为5’ ATGAGACCAAAACTCC 3’。