[发明专利]一种基于荧光dUTP的自动检测SSR分子标记的方法无效
| 申请号： | 201010239919.8 | 申请日： | 2010-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN101899520A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 甘四明;李发根;翁启杰;李梅;周长品;于晓丽 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院热带林业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 贺红星 |
| 地址： | 510000 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于荧光dUTP的自动检测SSR分子标记的方法，包括以下步骤：(1)配制PCR反应体系：取1.0μL 10×buffer、dNTP 25～50μM、MgCl22.0mM、前向引物0.5μM、后向引物0.5μM、Taq酶1个单位、荧光dUTP10pmol和基因组DNA 5ng混合，加超纯水补至10μL；(2)进行降落PCR：94℃4min；20个循环：94℃30s、70～60℃或者66～56℃30s且每个循环降低0.5℃、72℃1min；再26个循环：94℃30s、60或者56℃30s、72℃1min；最后72℃10min，得PCR产物；(3)取PCR产物1.0μL加入9.34μL超纯甲酰胺、0.16μL分子量内标，95℃5min后放置冰上快速冷却，在测序仪上进行标记检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 荧光 dutp 自动检测 ssr 分子 标记 方法 | ||
【主权项】：
一种基于荧光dUTP的自动检测SSR分子标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制PCR反应体系：取1.0μL 10×buffer、dNTP 25～50μM、MgCl22.0mM、前向引物0.5μM、后向引物0.5μM、Taq酶1个单位、荧光dUTP 10pmol和基因组DNA 5ng混合，加超纯水补至10μL；(2)进行降落PCR：94℃4min；20个循环：94℃30s、70～60℃或者66℃～56℃30s且每个循环降低0.5℃、72℃1min；再26个循环：94℃30s、60℃或者56℃30s、72℃1min；最后72℃10min，得PCR产物；(3)取所述PCR产物1.0μL加入9.34μL超纯甲酰胺、0.16μL分子量内标，95℃5min后放置冰上快速冷却，在测序仪上进行标记检测。
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