[发明专利]基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用。该构建方法包括：以含有猪瘟病毒疫苗C株基因组5’半长的重组质粒pA-F123为模板，用限制性内切酶SpeI和NsiI进行酶切，酶切产物经割胶回收后获得纯化的pA-ΔE2-F123质粒；用BamHI和SalI将含有猪瘟病毒疫苗C株基因组3’半长的F456片段从重组质粒pB-F456中切下，克隆于相同酶作用的pA-ΔE2-F123中，获得重组质粒pA-ΔE2-FL22。本发明构建的可插入式cDNA载体，可根据该病的流行形势，快速、方便的拯救携带不同基因型E2基因的重组C株病毒；重组病毒E2基因中引入探针标记序列可应用于荧光定量PCR鉴别检测方法中。拯救的重组病毒保留C株在兔体内复制以及对自然宿主猪无致病力等特性。

主权项

一种基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体的构建方法，包括步骤：(1)以含有猪瘟病毒疫苗C株基因组5′半长的重组质粒pA F123为模板，用限制性内切酶SpeI和NsiI进行酶切，酶切产物经割胶回收后获得纯化的pA ΔE2 F123质粒；(2)用BamHI和SalI将含有猪瘟病毒疫苗C株基因组3′半长的F456片段从重组质粒pB F456中切下，克隆于相同酶作用的pA ΔE2 F123中，获得重组质粒pA ΔE2 FL22。