[发明专利]基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体构建及应用

权利要求书

1.一种基于E2基因的可插入式猪瘟病毒cDNA载体的构建方法，包括步骤：

(1)以含有猪瘟病毒疫苗C株基因组5′半长的重组质粒pA-F123为模板，用限制性内切酶SpeI和NsiI进行酶切，酶切产物经割胶回收后获得纯化的pA-ΔE2-F123质粒；

(2)用BamHI和SalI将含有猪瘟病毒疫苗C株基因组3′半长的F456片段从重组质粒pB-F456中切下，克隆于相同酶作用的pA-ΔE2-F123中，获得重组质粒pA-ΔE2-FL22。

2.一种基于权利要求1所述方法的携带标记序列的流行毒株E2基因的感染性cDNA载体的构建方法，包括步骤：

(1)用通用上游引物E2-SpeI-U：5′-GCTAACTGGGGCACAAGG-3′和下游引物E2-NsiI-L：5′-CCCGACTTGAC-3′扩增不同流行毒株E2的830bp片段；同时，在不改变E2氨基酸序列的基础上，还应用此下游引物将标记序列引入扩增的流行毒株E2中，分别是位于下游引物3′端的第6位核苷酸和位于下游引物3′端的第9位核苷酸；

(2)PCR产物经割胶回收后，用限制性内切酶SpeI和NsiI进行酶切，酶切产物经割胶回收后克隆于所述重组质粒pA-ΔE2-FL22，获得携带不同流行毒株E2基因的感染性cDNA载体。