[发明专利]检测常见高危型人乳头瘤病毒的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测临床样本中宫颈癌、尖锐湿疣的病原体——高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的方法，特别是涉及一种实时PCR检测方法，该实时PCR检测方法使用分子信标荧光探针技术，能特异且灵敏地检测出13种常见的高危型人乳头瘤病毒，这13种HR-HPV是指HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。本发明还进一步涉及用于该临床检测的试剂盒。

主权项

一种用于检测常见高危型人乳头瘤病毒DNA的试剂盒，该试剂盒由(1)宫颈样本中人乳头瘤病毒DNA提取试剂；(2)聚合酶链反应混合液；(3)酶混合液；(4)阳性对照和(5)阴性对照样品组成，特征在于其中所使用的正和反向引物是：(1)5’‑CTGAYCCCAATAAATTTGGTTTTCCWGA‑3’(SEQ ID NO：1)(2)5’‑CTGATCCAAATAAATTTGGGTTACCTGA‑3’(SEQ ID NO：2)(3)5’‑CAGATCCTAATAAGTTTGGRCTTCCRGA‑3’(SEQ ID NO：3)(4)5’‑AGGGTATTTCGCGTGACATTGCCC‑3’(SEQ ID NO：4)(5)5’‑AGAGTGTTTAGGGTTACCTTACCTG‑3’(SEQ ID NO：5)(6)5’‑CTAAGGCCAACACCYAAWGGCT‑3’(SEQ ID NO：6)(7)5’‑TGACCACTTATGCCAACGC‑3’(SEQ ID NO：7)(8)5’‑CTAAGGCCAACACCAAGGGGCT‑3’(SEQ ID NO：8)(9)5’‑AYAATGGATGGCCACTGAGYC‑3’(SEQ ID NO：9)其中Y＝C/T；W＝A/T；R＝A/G。所使用的分子信标探针序列为：(10)5’‑FAM‑CCCGGGGCCTGTGTWGGTGTTGACCGGG‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：10)(11)5’‑FAM‑CGCGTGTGGGCCTGTGCTGACGCG‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：11)(12)5’‑FAM‑TGGGCCTGTGTTGGTTTAGAGCCCA‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：12)(13)5’‑FAM‑TGGGCATGTGTAGGCCTTGCCCA‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：13)(14)5’‑FAM‑GGCTGGTKTGGGCCTGTACAGCC‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：14)(15)5’‑FAM‑TGGGCTTGTGTAGGGGTGCCCA‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：15)(16)5’‑FAM‑TGGGCATGTGTAGGTWTGGAGCCCA‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：16)(17)5’‑FAM‑CGCGTTGGTGTGGGGTTGTGTGGAACGCG‑DABCYL‑3’(SEQ ID NO：17)其中W＝A/T；K＝T/G，