[发明专利]检测常见高危型人乳头瘤病毒的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测常见高危型人乳头瘤病毒DNA的试剂盒，该试剂盒由(1)宫颈样本中人乳头瘤病毒DNA提取试剂；(2)聚合酶链反应混合液；(3)酶混合液；(4)阳性对照和(5)阴性对照样品组成，特征在于其中所使用的正和反向引物是：

(1)5’-CTGAYCCCAATAAATTTGGTTTTCCWGA-3’(SEQ ID NO：1)

(2)5’-CTGATCCAAATAAATTTGGGTTACCTGA-3’(SEQ ID NO：2)

(3)5’-CAGATCCTAATAAGTTTGGRCTTCCRGA-3’(SEQ ID NO：3)

(4)5’-AGGGTATTTCGCGTGACATTGCCC-3’(SEQ ID NO：4)

(5)5’-AGAGTGTTTAGGGTTACCTTACCTG-3’(SEQ ID NO：5)

(6)5’-CTAAGGCCAACACCYAAWGGCT-3’(SEQ ID NO：6)

(7)5’-TGACCACTTATGCCAACGC-3’(SEQ ID NO：7)

(8)5’-CTAAGGCCAACACCAAGGGGCT-3’(SEQ ID NO：8)

(9)5’-AYAATGGATGGCCACTGAGYC-3’(SEQ ID NO：9)

其中Y＝C/T；W＝A/T；R＝A/G。

所使用的分子信标探针序列为：

(10)5’-FAM-CCCGGGGCCTGTGTWGGTGTTGACCGGG-DABCYL-3’(SEQ ID NO：10)

(11)5’-FAM-CGCGTGTGGGCCTGTGCTGACGCG-DABCYL-3’(SEQ ID NO：11)

(12)5’-FAM-TGGGCCTGTGTTGGTTTAGAGCCCA-DABCYL-3’(SEQ ID NO：12)

(13)5’-FAM-TGGGCATGTGTAGGCCTTGCCCA-DABCYL-3’(SEQ ID NO：13)

(14)5’-FAM-GGCTGGTKTGGGCCTGTACAGCC-DABCYL-3’(SEQ ID NO：14)

(15)5’-FAM-TGGGCTTGTGTAGGGGTGCCCA-DABCYL-3’(SEQ ID NO：15)

(16)5’-FAM-TGGGCATGTGTAGGTWTGGAGCCCA-DABCYL-3’(SEQ ID NO：16)

(17)5’-FAM-CGCGTTGGTGTGGGGTTGTGTGGAACGCG-DABCYL-3’(SEQ ID NO：17)

其中W＝A/T；K＝T/G，

2.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的常见高危型人乳头瘤病毒是指中国人群中常见的宫颈癌相关人乳头瘤病毒，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68共13种型。

3.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的宫颈样本是指用无菌棉拭子或宫颈刷取的疑似人乳头瘤病毒感染患者的宫颈脱落细胞，以及用于活检的组织标本或疣组织，这些样本需在低于4℃的环境下运送到检测实验室，并置于-70℃或-20℃冷冻保存。

4.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的人乳头瘤病毒DNA提取试剂由提取液A、提取液B和提取液C组成。

5.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的聚合酶链反应混合液由10×PCR缓冲液、dUTPs、正和反向引物、分子信标探针组成。

6.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的酶混合液由普通Taq酶(Tag DNA聚合酶)和UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)组成。

7.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的阳性对照是指经过测序确认过的含试剂盒检测范围内的高危型HPV DNA片段的质粒。

8.根据权利要求1的试剂盒，其中所说的阴性对照是高压灭菌水。