[发明专利]利用靶杂交及检测引物进行靶检测

摘要

本发明涉及一种利用靶杂交及检测引物（THD primer）的靶核酸序列的检测。本发明将对PCR（聚合酶链式反应）反应中使用的引物引入标记，使靶以及信号均得到扩增，并无需使用复杂的寡核苷酸，利用PCR（聚合酶链式反应）反应也可进行实时靶检测。本发明摆脱以往的实时PCR（聚合酶链式反应）方法的顽固的问题以及缺点。本发明仅利用标记引物成功的进行实时靶检测。利用这些本发明的特征，在多路传输方式中可进行优秀的实时靶检测。

主权项

一种利用靶杂交及检测引物的5’‑切割反应以及3’‑延长反应从DNA或者核酸混合物中检测靶核酸序列的方法，其特征在于，包括以下的步骤：步骤（a），对上述靶核酸序列与上述靶杂交及检测引物进行杂交，上述靶杂交及检测引物包含：（i）杂交核苷酸序列，其与上述靶核酸序列互补，以及（ii）相互作用性标记系统，其包含一个标记或者多个标记；步骤（b），借助模板‑依赖性核酸聚合酶发生上述靶杂交及检测引物的5’‑切割反应以及3’‑延长反应的条件下，将上述步骤（a）的结果物与具有5’→3’核酸酶活性的模板‑依赖性核酸聚合酶进行接触，上述靶杂交及检测引物借助上述模板‑依赖性核酸聚合酶的上述聚合酶活性而延长，并且借助上述模板‑依赖性核酸聚合酶的上述5’→3’核酸酶活性而切割，从而上述靶杂交及检测引物放出上述标记或者上述相互作用性标记系统的至少一个标记，以此产生用于表示上述靶核酸序列存在的信号；以及，步骤（c），对上述信号进行检测，上述信号表示上述靶核酸序列的存在。