[发明专利]存活蛋白mRNA的测定方法

摘要

本发明提供一种存活蛋白基因的mRNA的扩增、检测方法，该方法包括：在RNA扩增工序中，用寡核苷酸探针经时性地测定扩增的RNA产物量；所述寡核苷酸探针设计成若形成与扩增的RNA互补的双链则信号特性发生变化；所述RNA扩增工序包括以下工序：使用由具有与存活蛋白mRNA中的一部分相同的序列的第一引物、具有互补序列的第二引物(第一引物或第二引物的任意一方在其5′末端附加有启动子序列)构成的寡核苷酸的组合，利用逆转录酶，生成含有启动子序列的双链DNA，以该双链DNA为模板，并利用RNA聚合酶生成RNA转录产物，该RNA转录产物继而成为利用所述逆转录酶的DNA合成的模板而生成所述双链DNA。

主权项

一种试样中的存活蛋白mRNA的测定方法，其特征在于，所述测定方法使用了第一引物和第二引物，所述第一引物具有与存活蛋白mRNA中的特定碱基序列的一部分相同的序列，所述第二引物具有与特定碱基序列的一部分互补的序列，其中，第一引物或第二引物的任意一方是其5’末端添加有RNA聚合酶的启动子序列的引物，并且，所述测定方法包括下述工序：(1)以RNA为模板，利用具有RNA依赖性DNA聚合酶活性的酶合成与特定碱基序列互补的cDNA的工序，(2)利用具有核糖核酸酶H(RNaseH)活性的酶，分解所述(1)的反应中得到的RNA‑DNA双链的RNA的工序，即，生成单链DNA，(3)以所述单链DNA为模板，利用具有DNA依赖性DNA聚合酶活性的酶，生成具有启动子序列的双链DNA的工序，所述启动子序列能够转录所述特定碱基序列、或与所述特定碱基序列互补的序列的RNA，(4)利用具有RNA聚合酶活性的酶，以所述双链DNA为模板生成RNA转录产物的工序，(5)通过该RNA转录产物成为所述(1)的反应中的cDNA合成的模板，从而连锁性地生成RNA转录产物的工序，以及(6)测定所述RNA转录产物量的工序；并且，所述第一引物和第二引物为以下的任一种：(i)所述第一引物是由序列号1所示的碱基序列中的至少15个连续碱基构成的寡核苷酸，所述第二引物是由序列号3所示的碱基序列中的至少15个连续碱基构成的寡核苷酸，(ii)所述第一引物是由序列号2所示的碱基序列中的至少15个连续碱基构成的寡核苷酸，所述第二引物是由序列号4所示的碱基序列中的至少15个连续碱基构成的寡核苷酸。