[发明专利]一种纳他霉素高效提取纯化方法

摘要

本发明提出了一种纳他霉素发酵培养生产中的高效提取纯化工艺方法，其步骤为：(1)将富含纳他霉素的发酵液，进行弱酸性分离沉淀；(2)对沉淀稀释；(3)在酸性条件下溶解；(4)过滤取上清液；(5)调回到中性结晶；(6)分离干燥，得到纳他霉素产品。本发明是先将原本酸性发酵液调节至弱酸性，使纳他霉素附着与菌体，收集菌体后在酸性环境下用甲醇溶解纳他霉素，这样避免了甲醇和酸碱的大量使用，而且提高了提取的得率和纯化的纯度。本发明综合利用有机溶剂、pH值调节和温度控制的方法，并采用残液套用二次提取、二级纯化的方法，实现纳他霉素的高效提取和纯化，提取得率达到90％，纯度达到95％。本发明能够实现纳他霉素的低成本、高产量、高品质的生产。

主权项

一种纳他霉素高效提取纯化工艺方法，其特征在于步骤为：(1)将纳他霉素发酵培养生产中产生的富含纳他霉素的发酵液，进行弱酸性分离沉淀，将发酵液用NaOH调节pH值至6.0，并在50℃保温10～12小时；离心去除上清，保留沉淀，或板框过滤去除部分水份；(2)稀释，测定沉淀或滤渣中水分含量，用甲醇/水溶液悬浮沉淀，使甲醇与水的比例为65/35，v/v，降温至5～10℃；(3)酸性条件下溶解，将上述悬浮液用HCL调节pH值至3.0，在5～10℃条件下，搅拌30～50分钟，使纳他霉素完全溶解；(4)过滤取上清液，将第(3)步中的悬浮液离心或板框过滤，保留上清；将沉淀或滤渣用比例为70/30，v/v的甲醇/水溶液洗涤，保留上清，并与第一次上清合并，以提高纳他霉素得率；(5)调回到中性结晶，用NaOH将第(4)步中的上清液pH调节至7.0，并室温孵育16～20小时，使纳他霉素完全结晶，溶液残存纳他霉素应低于1.5g/L，残液收集后二次提取；(6)分离干燥，离心或板框过滤收集纳他霉素晶体，水洗两次后真空干燥或其他方式去除水分，使水分含量低于9％，得到纳他霉素产品。