[发明专利]一种利用粪便中SFRP2基因超甲基化筛查大肠癌的方法

摘要

本发明属于医学领域，提供了一种筛查大肠癌的方法，该方法是一种利用粪便中SFRP2基因超甲基化筛查大肠癌，通过制作标本、收集数据、处理数据来完成筛查。本发明具有极高的准确率，为大肠癌的早期发现、早期诊断治疗提供了新的方法；其设计合理，无创伤，痛苦小，费用低，可作为大肠癌的普查方法，如果应用到临床，能大幅提高大肠癌的治愈率，降低我国大肠癌的病死率，具有极高的经济效益和社会效益。

主权项

1. 一种利用粪便中SFRP2基因超甲基化筛查大肠癌的方法，其特征是通过以下步骤实现的：(1)粪便DNA从粪便标本用QIAamp DNA Stool Mini Kit分离DNA，置于-70--85℃保存备用；(2)取500ng-2μg的基因组DNA放在容器中，用终浓度为0.15-0.25mol/L的NaOH在36-37.5℃中变性14-17分钟；添加30μL的9-11mmol/L的对苯二酚和520μL的2.0-3.5mol/L的NaHSO3，pH4.9-5.1，混合物在50-60℃下培养15-18小时；重亚硫酸盐修饰的DNA用Wizard DNA Cleanup kit纯化；DNA用NaOH在室温下培养14-17分钟脱磺酸基，终浓度为0.25-.035mol/L，用醋酸氨中和，PH为6.5-7.3，终浓度为0.3mol/L；DNA用乙醇沉淀回收，用蒸馏水稀释到终浓度为4.5-5.5ng/μL；3μL的重亚硫酸盐修饰的DNA和从80μL提取出的等量的DNA用来扩增；PCR在反应容器中进行，包括17.875μL的ddH2O、2.5μL的10×PCR Buffer、2μL的dNTP Mixture、0.25μL的Forward Primer、0.25μL的Reverse Primer、2μL的Template和0.125μL的TaKaRa Taq HS，在以下条件下进行：93-97℃变性5分钟进入循环，循环温度及时间为93-97℃，25-35秒；退火温度：U型引物45-55℃，M型引物60-64℃，25-30秒；70-75℃，25-35秒，共40个循环，70-75℃延长5分钟；(3)进行电泳分析，根据电泳图，得出甲基化结果；根据MSP原理判定有无肿瘤存在。