[发明专利]同步鉴别诊断新城疫病毒和禽流感病毒的核酸检测试剂盒

摘要

本发明属于检验检疫技术领域，具体为一种同步鉴别诊断新城疫病毒和禽流感病毒的核酸检测试剂盒。该试剂盒的检测试剂包括用于硅胶吸附柱法提取病毒RNA的提取试剂、用于RT－PCR Taq Man荧光探针法检测核酸的检测扩增试剂和供提取病毒RNA的固体组织标本的预处理液，此外，还采用体外转RNA作为试剂盒的阳性对照。该试剂盒可以同步快速鉴别诊断禽类疫病中传染性极高而症状相似的新城疫与禽流感，并可确定出H5、H7、H9等当前主要流行亚型，同时可区分出传染源是否为对人高致病性的禽流感或无致病性或低致病性禽流感等。本试剂盒适于畜牧兽医站或出入境检验检疫局等实验室的使用，并可用作大规模的流调及疫情监测等。

主权项

1、一种同步鉴别诊断新城疫病毒和禽流感病毒的核酸检测试剂盒，其特征在于其检测试剂包括用硅吸附柱法提取病毒RNA的提取试剂和用作RT-PCR TaqMan荧光探针法检测的核酸扩增试剂，其中：提取试剂的组成和配方如下：裂解液：4-5.5M GTC，10-50m M Tris-HCl Ph6.0-8.0，5-20％去垢剂、1-10μg/ml多聚腺苷酸或其它载体核酸；去抑制剂：1-50mg/ml蛋白酶；洗涤液A：0.5-4M GTC，10-50m M Tris-HCl Ph6.5-8.0，10-70％乙醇，为体积浓度；洗涤液B：2-20mM NaCl，0-20mM Tris-HCl Ph6.5-8.0，30-80％乙醇，为体积浓度；洗脱液：含0.01-0.05％重量NaN3的DEPC处理过的纯化水；核酸吸附柱：硅胶膜性质的层析柱；核酸扩增检测试剂的组成与配方如下：RT-PCR反应液A：40-400MM Trizma-Cl或Tricine-Cl，Ph8.3-9.2；40-120MM KCl；20-80MM(NH4)2SO4；10-20MM MgCl2；0.01-0.05％Brij-35或Triton X-100或Tween 20；0.8-2MM d NTPs，5-40％(mg/ml)甘油；RT-PCR反应液B：AMV或SuperScriptIII逆转录酶，1-100U/反应，R Nasin 4-40U/反应，抗体封闭或寡核苷酸封闭的HotStart Taq Pol，1-5U/反应，适量RT促进剂与糖类稳定剂；NDV PCR反应液C：0.05-0.8μM NDV正向引物(NDVF)，0.05-0.8μM NDV反向引物(NDVR)，0.01-0.2μM NDV TaqMan探针(NDVP)；AIV PCR反应液C：0.05-0.8μM AIV正向引物(AIVF)，0.05-0.8μM AIV反向引物(AIVR)，0.01-0.2μ M AIV TaqMan探针(AIVP)；H5 PCR反应液C：0.05-0.8μM H5正向引物(H5F)，0.05-0.8μM H5反向引物(H5R)，0.01-0.2μM H5 TaqMan探针(H5P)；H7 PCR反应液C：0.05-0.8μ M H7正向引物(H7F)，0.05-0.8μ M H7反向引物(H7R)，0.01-0.2μ M H7 TaqMan探针(H7P)；H9 PCR反应液C：0.05-0.8μ M H9正向引物(H9F)，0.05-0.8μ M H9反向引物(H9R)，0.01-0.2μ M H9 TaqMan探针(H9P)；N1 PCR反应液C：0.05-0.8μ M N1正向引物(N1F)，0.05-0.8μ M N1反向引物(N1R)，0.01-0.2μ M N1 TaqMan探针(N1P)；这里，NDV为新城疫病毒，AIV为禽流感病毒，H5、H7、M9和N1为禽流感病毒亚型。