[发明专利]同步鉴别诊断新城疫病毒和禽流感病毒的核酸检测试剂盒

权利要求书

1、一种同步鉴别诊断新城疫病毒和禽流感病毒的核酸检测试剂盒，其特征在于其检测试剂包括用硅吸附柱法提取病毒RNA的提取试剂和用作RT-PCR TaqMan荧光探针法检测的核酸扩增试剂，其中：

提取试剂的组成和配方如下：

裂解液：4-5.5M GTC，10-50m M Tris-HCl Ph6.0-8.0，5-20％去垢剂、1-10μg/ml多聚腺苷酸或其它载体核酸；

去抑制剂：1-50mg/ml蛋白酶；

洗涤液A：0.5-4M GTC，10-50m M Tris-HCl Ph6.5-8.0，10-70％乙醇，为体积浓度；

洗涤液B：2-20mM NaCl，0-20mM Tris-HCl Ph6.5-8.0，30-80％乙醇，为体积浓度；

洗脱液：含0.01-0.05％重量NaN₃的DEPC处理过的纯化水；

核酸吸附柱：硅胶膜性质的层析柱；

核酸扩增检测试剂的组成与配方如下：

RT-PCR反应液A：40-400MM Trizma-Cl或Tricine-Cl，Ph8.3-9.2；40-120MM KCl；20-80MM(NH₄)₂SO₄；10-20MM MgCl₂；0.01-0.05％Brij-35或Triton X-100或Tween 20；0.8-2MM d NTPs，5-40％(mg/ml)甘油；

RT-PCR反应液B：AMV或SuperScriptIII逆转录酶，1-100U/反应，R Nasin 4-40U/反应，抗体封闭或寡核苷酸封闭的HotStart Taq Pol，1-5U/反应，适量RT促进剂与糖类稳定剂；

NDV PCR反应液C：0.05-0.8μM NDV正向引物(NDVF)，0.05-0.8μM NDV反向引物(NDVR)，0.01-0.2μM NDV TaqMan探针(NDVP)；

AIV PCR反应液C：0.05-0.8μM AIV正向引物(AIVF)，0.05-0.8μM AIV反向引物(AIVR)，0.01-0.2μ M AIV TaqMan探针(AIVP)；

H5 PCR反应液C：0.05-0.8μM H5正向引物(H5F)，0.05-0.8μM H5反向引物(H5R)，0.01-0.2μM H5 TaqMan探针(H5P)；

H7 PCR反应液C：0.05-0.8μ M H7正向引物(H7F)，0.05-0.8μ M H7反向引物(H7R)，0.01-0.2μ M H7 TaqMan探针(H7P)；

H9 PCR反应液C：0.05-0.8μ M H9正向引物(H9F)，0.05-0.8μ M H9反向引物(H9R)，0.01-0.2μ M H9 TaqMan探针(H9P)；

N1 PCR反应液C：0.05-0.8μ M N1正向引物(N1F)，0.05-0.8μ M N1反向引物(N1R)，0.01-0.2μ M N1 TaqMan探针(N1P)；

这里，NDV为新城疫病毒，AIV为禽流感病毒，H5、H7、M9和N1为禽流感病毒亚型。