[发明专利]一种微囊藻毒素分离纯化的方法

摘要

一种微囊藻毒素分离纯化的方法，属于生化分离技术领域。本发明从有毒蓝藻水华干粉中用乙酸水溶液为提取剂，采用经济的大孔吸附树脂D101作为分离纯化材料，通过两次过大孔吸附树脂层析柱分离，洗脱液为不同浓度的乙醇－水溶液，得到微囊藻毒素－RR、微囊藻毒素－YR和微囊藻毒素－LR的乙醇水溶液；所得微囊藻毒素－RR、微囊藻毒素－YR和微囊藻毒素－LR经HPLC－UV/MS检测纯度≥80％。本发明对设备要求不高，分离过程所用材料安全、成本低，易于工业化生产，适用于需求量大但纯度要求不高的生物降解、光解和吸附等环境类实验研究。

主权项

1.一种微囊藻毒素分离纯化的方法，其特征在于，将有毒蓝藻水华干粉用乙酸水溶液为提取剂，采用大孔吸附树脂D101作为分离纯化材料，通过两次过大孔吸附树脂层析柱分离，洗脱液为不同浓度的乙醇-水溶液，得到微囊藻毒素-RR、微囊藻毒素-YR和微囊藻毒素-LR的乙醇水溶液；步骤为：A.称取有毒蓝藻水华干粉，加入其重量20-30倍的5％的乙酸溶液，连续搅拌40-50min，用6000g离心10min，取上清液；沉淀按上述提取步骤重复提取一次，合并两次提取上清，用0.45微米的滤膜过滤后旋转蒸发，得微囊藻毒素乙酸提取浓缩液备用，浓缩液的重量为原料蓝藻水华干粉重量的6-10倍；B.大孔吸附树脂D101层析柱，10×100cm，酒精浸泡树脂24h后，依次用4％HCl、2％HCl各浸泡3-5h，去离子水洗成中性，将A步骤中的提取浓缩液调pH2.8-3.2后过柱，然后依次用为提取浓缩液一半体积的水、一半体积的15％乙醇淋洗，再依次用与提取浓缩液等体积的30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇洗脱，收集洗脱液；C.将步骤B中获得的30％乙醇洗脱液旋转蒸发去乙醇后，再用上述同样条件新处理的大孔吸附树脂进行分离，过柱，然后用与步骤B同样体积的15％乙醇淋洗，再用30％乙醇洗脱，分段收集洗脱液；用HPLC-UV/MS法测定，得到含微囊藻毒素-RR乙醇水溶液；D.将步骤B中获得的40％和50％乙醇洗脱液合并，旋转蒸发去乙醇后，再用上述同样条件新处理的大孔吸附树脂进行分离，过柱，然后用与步骤B同样体积的15％乙醇淋洗，再用40％乙醇洗脱，分段收集洗脱液；用HPLC-UV/MS法测定，分别得到微囊藻毒素-YR乙醇水溶液和微囊藻毒素-LR乙醇水溶液；E.微囊藻毒素的纯度检测采用HPLC-UV/MS法测定，色谱柱：Symmetry C18柱，2.1×150mm，3.0μm，柱温30.0℃；流动相：乙腈-水-甲酸，体积比依次为30∶70∶0.1；流速：0.3ml/min；紫外-检测器：238nm；液相色谱进样体积：10μL；质谱条件：采用正电子电离方式，喷雾电压3.7KV，脱溶温度：300℃，离子源温度：120℃，离子能量：1.0v，锥孔电压：30-60V，扫描范围：m/z＝400-1200；色谱峰面积归一化法计算微囊藻毒素纯度；由质谱信号判定色谱峰已基本分离。