[发明专利]利用原生质体不对称融合技术获得香蕉体细胞杂种的方法无效
申请号: | 200710029667.4 | 申请日: | 2007-08-10 |
公开(公告)号: | CN101139582A | 公开(公告)日: | 2008-03-12 |
发明(设计)人: | 肖望;黄学林;黄霞;魏岳荣;龚庆 | 申请(专利权)人: | 中山大学 |
主分类号: | C12N15/05 | 分类号: | C12N15/05;A01H4/00 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 | 代理人: | 裘晖 |
地址: | 510275广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种利用原生质体不对称融合技术获得香蕉体细胞杂种的方法,该方法是采用将香蕉胚性悬浮细胞在酶解液中进行酶解获得原生质体,受体原生质体用碘乙酰胺进行处理,供体原生质体用紫外灯进行照射处理,将供体原生质体和受体原生质体混合后,用聚乙二醇法进行融合。融合产物悬浮于原生质体液体培养基中进行看护培养,获得的细胞团转移到体胚诱导培养基上进行培养至体胚萌发进行培养即获得完整的体细胞杂种植株。本发明只有融合产物能够再生植株,减少了在培养过程中的工作量及获得苗后的筛选、鉴定的工作量;同时本发明所采用的培养基配方简单,便宜,解决了香蕉原生质体融合后融合产物培养过于繁琐的问题。 | ||
搜索关键词: | 利用 原生 质体 不对称 融合 技术 获得 香蕉 体细胞 杂种 方法 | ||
【主权项】:
1.一种利用原生质体不对称融合技术获得香蕉体细胞杂种的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)香蕉原生质体的分离和纯化:将继代培养3~5d、直径200μm以下的香蕉胚性悬浮细胞与酶解液混合,所述细胞密实体积与酶解液体积比例为1∶3~5,在27+1℃、黑暗条件下,30~50rpm震荡8~10h进行酶解;将酶解后的混合物分离纯化得到香蕉受体原生质体或香蕉供体原生质体;(2)香蕉受体原生质体的处理:将步骤(1)获得的香蕉受体原生质体采用最低致死剂量的碘乙酰胺处理14~18min,将处理后的混合液用原生质体洗涤液洗涤2~3次,最后用原生质体液体培养基将处理过的原生质体稀释到浓度为105~106个/mL。香蕉供体原生质体的处理:将步骤(1)获得的香蕉供体原生质体用原生质体液体培养基稀释到浓度为105~106个/mL,然后铺成薄层,在紫外灯下照射60~180s;(3)原生质体的不对称融合:将步骤(2)处理后的受体原生质体和供体原生质体按1∶1体积比混合得到原生质体悬液;将原生质体悬液采用聚乙二醇融合法进行融合得到融合产物;(4)融合产物的看护培养:将1.2%(w/v)、pH5.6~5.8的琼脂糖溶液灭菌后,温度降到30~35℃时,等体积加入到含15~20mL细胞密实体积%看护细胞的液体看护培养基中搅匀,凝固后,在其上覆盖一层消毒过的混合纤维素滤膜,将步骤(3)的融合产物转到混合纤维素滤膜上,在27+1℃、黑暗下培养,直到长出0.5~1.0mm的融合产物的细胞团;所述看护细胞为直径小于200μm的香蕉胚性悬浮细胞;(5)从融合产物获得细胞团的体胚诱导:将步骤(4)中获得的融合产物的细胞团转到体胚诱导培养基上,进行体胚诱导,得到直径为1.0~1.5mm的成熟体胚;(6)体胚的萌发与成苗:将步骤(5)中诱导得到的成熟体胚转移到体胚诱导培养基上,每隔15~20d继代一次直到体胚萌发,得到再生苗,将芽高2~3cm的再生苗进行培养,即得到体细胞杂种植株。
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- 罗伯特·J·亨利;彼得·C·邦多克;艾利森·C·克劳福德 - 谷物食品CRC有限公司
- 2007-10-04 - 2009-09-23 - C12N15/05
- 本发明提供分离的核酸序列,其包含对应于DNA序列的启动子活性区的核苷酸序列,其中所述分离的核酸序列源自谷类种子。分离的核酸序列可用于在谷类种子的特定组织内调控高水平的基因表达。还提供包含所述分离的核酸序列(或其变体)与可转录序列可操作地连接的遗传构建体,使用所述遗传构建体产生重组蛋白的方法和促进靶物表达至植物胚乳的方法。
- 一种转移柑橘胞质雄性不育性状的方法-200810237432.9
- 郭文武;蔡小东;付婧;程运江;邓秀新 - 华中农业大学
- 2008-12-26 - 2009-07-08 - C12N15/05
- 本发明属于植物新品种选育技术领域,具体涉及一种转移柑橘胞质雄性不育性状的方法。其特征在于,根据柑橘细胞对称融合可以再生二倍体叶肉亲本型胞质杂种的现象及其分子水平上的组成特征,提出了通过融合组合选配、经培养获得胞质杂种、转移由线粒体基因组控制的胞质雄性不育性状、从而改良二倍体有核或多核柑橘品种。发明了胞质雄性不育温州蜜柑与中国特色有核或多核柑橘类型之间的对称融合,成功地创造了一批二倍体胞质杂种,实现了温州蜜柑线粒体基因组的有效转移,为二倍体无核柑橘选育提供了新方法及新种质材料。
- 与细胞pH相关的植物核酸及其用途-200780019809.7
- F·夸特罗基奥;R·科伊斯;W·弗尔维耶;K·斯贝尔特;F·布鲁格里拉;水谷正子 - 教会高等教育科研与病人护理协会;国际花卉开发有限公司
- 2007-05-28 - 2009-06-10 - C12N15/05
- 概括而言,本发明涉及植物分子生物学以及可用于操控植物生理或生物化学特性的试剂的领域。更具体地,本发明提供了基因和蛋白质试剂,其能够调节或改变在植物的细胞、细胞群、细胞器、部分或生殖部分中的酸性或碱性水平。还提供了经基因改造的植物、植物部分、子代、后代和生殖材料(包括花或开花的部分),其具有相对未经基因改造的植物而言展示出改变的细胞pH的细胞。
- 长穗偃麦草在创制低乳糜泻抗原编码DNA小麦中的应用-200710113909.8
- 陈凡国;夏光敏;张尚立;陈梦竹;赵峰 - 山东大学
- 2007-10-17 - 2008-05-07 - C12N15/05
- 本发明公开了一种利用长穗偃麦草创制低乳糜泻抗原(celiac disease epitope)编码DNA小麦的应用。该应用利用同源序列法筛选出低乳糜泻抗原编码DNA的小麦远缘禾草长穗偃麦草;之后利用体细胞杂交技术将远源禾草部分基因组或DNA转入小麦中,最后利用同源序列法筛选低乳糜泻抗原编码DNA小麦体细胞杂种。本发明获得低乳糜泻抗原编码DNA小麦体细胞杂种可以用于低乳糜泻抗原小麦的育种工作,为解决乳糜泻类病人治疗期间的食品问题奠定基础。
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