[发明专利]禽流感病毒PCR扩增和杂交检测与分型方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及禽流感病毒的PCR扩增和核酸杂交检测与分型的方法，以及禽流感病毒的检测试剂盒。本发明所述的禽流感病毒检测及分型方法，是对AIV的基因组核酸进行PCR反应后利用PCR产物进行核酸杂交，通过酶标记的AIV通用型和亚型特异性探针进行禽流感病毒的检测和分型。涉及的禽流感病毒包括通用型和H1、H3、H5、H7、H9、N1、N2等目前主要流行的亚型。本发明还提供了一种禽流感病毒的检测试剂盒。本发明提供的检测方法使用的主要试剂均来源于本发明所包括的试剂盒，实验流程少，操作简便易行，消耗费用低。和其他禽流感病毒检测的方法相比较，本发明的优势还在于进行检测的同时可以对禽流感病毒进行分型。

主权项

1、一种禽流感病毒PCR扩增和杂交检测与分型方法，其特征在于，包括以下步骤：a)分析在国际基因数据库GenBank中登录的所有禽流感病毒即AIV基因组全序列，确定针对AIV通用型和AIV主要亚型即H1、H3、H5、H7、H9、N1、N2亚型的高度保守的特异性核酸序列作为靶序列；b)针对所述靶序列设计并合成AIV通用型和各主要亚型的特异性引物；c)针对所述靶序列位于所述引物之间的序列设计并合成AIV通用型和各主要亚型的扑获探针和生物素标记的杂交探针；d)提取待检样本RNA，在包含所述引物的RT-PCR反应液中进行RT-PCR扩增得到样本cDNA；e)将所述的生物素标记杂交探针和变性液加入PCR产物中，进行变性反应；f)将变性产物与杂交液加入包含所述扑获探针的检测条中，进行杂交反应；以及g)显色和终止反应，通过检测条的显色条带，判断待检样本是否含有禽流感病毒以及确定病毒的分型。