[发明专利]利用滚环扩增扩增和克隆单个DNA分子有效
| 申请号： | 200680024024.4 | 申请日： | 2006-05-01 |
| 公开（公告）号： | CN101213311A | 公开（公告）日： | 2008-07-02 |
| 发明（设计）人： | 克莱德·A·哈奇森三世;汉密尔顿·O·史密斯 | 申请（专利权）人： | J·克雷格·文特尔研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 | 代理人： | 封新琴 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明例如涉及通过等温滚环机制，利用随机或部分随机的引物以及φ29型DNA聚合酶用于扩增单链环状DNA分子(例如具有约5－6kb大小)少量拷贝(例如单拷贝)的方法。该方法还可以用于通过非滚环类型的多重置换扩增来扩增DNA，其包括将反应组分在小体积中温育，例如约10μl或更小，如约0.6μl或更小。扩增程度可为约109倍或更高。描述了利用本发明的滚环扩增方法的无细胞克隆DNA的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 扩增 克隆 单个 dna 分子 | ||
【主权项】：
1.用于扩增单拷贝的DNA模板的一部分或全部的方法，包括在10μl或更小体积中，在有效促进DNA链置换的条件下，在基本上等温的温度将DNA与链置换、续进性DNA聚合酶和随机或部分随机的引物组接触，其中扩增如下进行：a)引物浓度为约50μM或更小；和/或b)在使得被扩增的DNA足够无本底、因此无需进一步纯化就可将其直接用于测序、限制性酶分析、杂交分析、和/或与其他的DNA分子体外重组以组装基因或基因组的一部分的条件下进行。
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