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[发明专利]一种利用荧光分光光度计对乙醛脱氢酶活性进行快速检测的方法-CN201510214484.4有效
发明人： 龚钢明;魏晓聪;吴范宏 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2015-04-29 - 公布日： 2018-04-06 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开一种利用荧光分光光度计对乙醛脱氢酶活性进行快速检测的方法，即首先用Tris‑HCl缓冲液将辅酶I配置成不同浓度梯度的辅酶I溶液，检测不同浓度的辅酶I溶液的荧光值，制作辅酶I浓度与荧光值相对应的标准曲线，将由粗乙醛脱氢酶酶液、pH7.0‑9.0，0.1 mol/L Tris‑HCl缓冲液等形成的反应体系控制温度为25‑40℃保持10‑30min后，在激发波长为320nm‑380nm，发射波长为440nm‑480nm下测定反应体系中粗乙醛脱氢酶酶液酶液每分钟的荧光变化值，最后依公式酶活力单位=△荧光值/3来计算乙的醛脱氢酶酶活力单位。该测定方法操作简便，灵敏度高。
一种利用荧光分光光度计乙醛脱氢酶活性进行快速检测方法

[发明专利]一种测定乙醇脱氢酶活力的方法-CN201610400672.0在审
发明人： 龚钢明;杨树丽;魏晓聪 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2016-06-08 - 公布日： 2016-11-09 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明提供了一种测定乙醇脱氢酶酶活力的方法，包括一个配置缓冲体系的步骤，所述的缓冲体系为甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液；一个配置一定浓度的酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液，并测定其荧光值，选取线性范围的步骤；一个制备酶液的步骤，将培养好的细胞离心收集菌体，加磷酸盐缓冲液制成菌悬液，经超声细胞粉碎仪破碎后离心收集上清液，上清液即为待测酶液；将酶液与反应体系分别在30‑37℃，温育3‑5min，混合后，在3‑5min内，以320nm‑380nm，激发波长和440nm‑480nm发射波长下，测定测反应体系中每分钟的荧光变化值，计算酶活力，酶活力单位（U/ml）=△_荧光值/分钟。本发明提高了酶活测定的灵敏度。
一种测定乙醇脱氢酶活力方法

[发明专利]一种生产硫酸软骨素的方法-CN201610515101.1在审
发明人： 龚钢明;赵芳芳 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2016-07-04 - 公布日： 2016-10-12 - 主分类号： C12P19/26 文献下载
摘要：本发明提供了一种生产硫酸软骨素的方法，将芽孢杆菌以4‑6％接种量至种子培养基中，所述的芽孢杆菌的保藏编号CCTCC NO:M2016263，振荡培养得到种子液，将种子液以接种量为4‑6％接入发酵培养基中，在摇床上进行培养发酵得到含硫酸软骨素的发酵液；将得到的硫酸软骨素发酵液提纯后得到硫酸软骨素。本发明方法步骤简单，条件温和，产量较高，发酵生产原料不受动物骨原料短缺的限制，发酵产品可用于药品原料和保健品原料。
一种生产硫酸软骨素方法

[发明专利]一种芽孢杆菌及其应用-CN201610518822.8在审
发明人： 龚钢明;杨树丽 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2016-07-04 - 公布日： 2016-09-07 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于微生物学领域，本发明提供了一种芽孢杆菌，其保藏编号CCTCCNO:M2016263。本发明还提供了上述一种芽孢杆菌在发酵生产硫酸软骨素中的应用。本发明的菌株能合成和分泌硫酸软骨素。本发明不受动物软骨资源匮乏的约束，有利于大量生产；生产工艺简单，条件温和，因而成本较低；此外环境污染小。用本发明的菌株生产的硫酸软骨素可作为药品、保健品等的原料。
一种芽孢杆菌及其应用

[发明专利]一种生产硫酸软骨素的方法-CN201610307883.X无效
发明人： 龚钢明;洪玲;赵芳芳 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2016-05-11 - 公布日： 2016-07-20 - 主分类号： C12P19/26 文献下载
摘要：本发明提供了一种生产硫酸软骨素的方法，将巨大芽孢杆菌以4‑6％接种量至种子培养基中，振荡培养得到种子液，将种子液以接种量为 4‑6％接入发酵培养基中，在摇床上进行培养发酵得到含硫酸软骨素的发酵液；将得到的硫酸软骨素发酵液提纯后得到硫酸软骨素。本发明方法步骤简单，条件温和，产量较高，发酵生产原料不受动物骨原料短缺的限制，发酵产品可用于药品原料和保健品原料。
一种生产硫酸软骨素方法

[发明专利]一种尼泊尔菊三七总黄酮的制备方法-CN201610118588.X在审
发明人： 龚钢明;晋丛斌;李张宇 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2016-03-02 - 公布日： 2016-06-15 - 主分类号： A61K36/28 文献下载
摘要：本发明提供了一种尼泊尔菊三七总黄酮的制备方法，称取尼泊尔菊三七干叶，将尼泊尔菊三七干叶粉碎；在尼泊尔菊三七干粉末中加乙醇，搅匀，在35～65℃，用超声波或微波辅助提取，或直接在水浴中提取，提取完过滤，收集上滤液；将滤液减压浓缩，浓缩过程控制温度为50～65℃，压力为-0.08～-0.1MPa；根据公式测定黄酮的提取率；将浓缩后的滤液加入到AB-8大孔吸附树脂层析柱中，分别用水和乙醇洗脱，控制温度为25～38℃，压力为-0.08～-0.1MPa，洗脱液减压浓缩并测定黄酮提取率。本发明步骤简单，条件温和，生产过程不产生环境污染。产品可用于加工药品和保健品。
一种尼泊尔三七黄酮制备方法

[发明专利]景天三七中柚皮苷的分离方法-CN201510822710.7在审
发明人： 龚钢明;晋丛斌 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2015-11-24 - 公布日： 2016-02-03 - 主分类号： C07H17/07 文献下载
摘要：本发明属于植物提取技术领域，具体为一种景天三七中柚皮苷的分离方法。本发明方法包括以下步骤：将景天三七干叶粉碎成40-80目，再将粉末用60％-90％乙醇按料液比1:30-50(g/ml)浸泡后，进行超声波辅助提取，提取后，过滤收集滤液，旋转蒸发浓缩后，再用D-101大孔树脂进行分离纯化，收集在紫外280nm下吸收值最高的组分，经浓缩后，用硅胶柱(100-200目)近一步分离纯化，洗脱液为四氯化碳和甲醇。收集在紫外280nm吸收值最高的组分，即得到柚皮苷。柚皮苷是一种双氢黄酮类化合物，具有抗炎、抗病毒、镇痛、降血压等活性。本发明方法提取效率高，且其制备方法简单，操作方便。
景天三七中柚皮苷分离方法

[发明专利]一种乳酸菌的固定化胶囊及其制备方法和应用-CN201510105640.3在审
发明人： 龚钢明;周月;陆冬明;郭诗芸 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2015-03-11 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12N11/10 文献下载
摘要：本发明公开一种乳酸菌固定化胶囊及制备方法和应用，即将离心收集的湿乳酸菌菌体与质量百分比浓度为2%的海藻酸钠水溶液混合均匀后以1.5-2.0ml/min的速度垂直滴入到质量百分比浓度为1.5%的氯化钙水溶液中搅拌，固化，过滤，得到的凝胶珠洗涤后加入为凝胶珠体积10倍的质量百分比浓度为2%的壳聚糖醋酸水溶液进行成膜反应，所得反应液中加入为其体积10倍的质量百分比浓度为0.15%的海藻酸钠水溶液进行固定，然后过滤，所得沉淀1用pH5.0、浓度为0.055mol/L的柠檬酸钠水溶液作用10min，然后过滤，所得的沉淀2即为乳酸菌的固定化胶囊。其用于对食品中亚硝酸盐的降解，重复使用五次，效果不降低。
一种乳酸菌固定胶囊及其制备方法应用

[发明专利]一种番茄提取物及其制备方法和应用-CN201410348639.9有效
发明人： 龚钢明;韩佳;王沁;张婉萍 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2014-07-22 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： A61K8/97 文献下载
摘要：本发明公开一种番茄提取物及制备方法和应用，所述番茄提取物，即首先将番茄洗净，破碎匀浆，得到的番茄匀浆液和水进行混合，得到的混合液在功率为60-80w下超声波辅助提取6-10min；超声辅助提取后在45℃的水浴锅中浸提30-40min，浸提完成后于8000r/min,4℃的冷冻离心机上离心15min，得到的上清液过滤，所得的滤液控制压力在0.08-0.1MPa，温度为50-65℃进行减压浓缩，浓缩后的剩余物控制温度为-20~-40℃进行冷冻干燥，即得番茄提取物。该提取物对酪氨酸酶具有抑制作用，可用于作酪氨酸酶抑制剂，应用于美白护肤品中，性能安全可靠，不会有副作用。且其制备方法简单，操作方便。
一种番茄提取物及其制备方法应用

[发明专利]一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因及其编码的蛋白质和应用-CN201210037774.2无效
发明人： 龚钢明;何婷婷;高然 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2012-02-20 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因，含有该基因的重组载体、用该载体转化的宿主以及利用该转化体生产该基因的表达产物及其应用。即以金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌、布鲁氏杆菌;大肠杆菌的亚硝酸盐还原酶基因为参考，进行引物设计，用植物乳杆菌提取的基因组DNA为模板，通过PCR技术扩增植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶的基因片段，将该片的连接到pET-32a（+）表达载体中，再转入大肠杆菌BL21（DE3）细胞中，经IPTG诱导后，进行植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶(NiRL)蛋白表达，从而获得植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶蛋白。
一种植物杆菌亚硝酸盐还原酶基因及其编码蛋白质应用

[发明专利]一种大肠杆菌NrfA基因表达蛋白多克隆抗体及其制备方法-CN201110407260.7无效
发明人： 龚钢明;何婷婷;高然 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2011-12-09 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C07K16/40 文献下载
摘要：一种大肠杆菌NrfA基因表达蛋白的多克隆抗体制备方法：以大肠杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到NrfA基因编码区，构建pET-28a（+）-NrfA表达载体，转入大肠杆菌BL21（DE3）后，经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白；再免疫新西兰雄兔，制备多克隆抗体；免疫获得的多克隆抗体用ELISA检测，其效价为1：204900，经Westernblotting分析，抗体的特异性较好。该多克隆抗体可用于研究其他微生物中亚硝酸盐还原酶与大肠杆菌亚硝酸盐还原酶之间的相关结构与功能。也为进一步深入研究大肠杆菌亚硝酸盐还原酶的作用机理与活性调节提供基础。
一种大肠杆菌 nrfa 基因表达蛋白克隆抗体及其制备方法

[发明专利]一种细菌亚硝酸盐还原酶活性测定方法-CN201110376853.1有效
发明人： 龚钢明;何婷婷;高然 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2011-11-24 - 公布日： 2012-06-13 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：本发明公开了一种细菌亚硝酸还原酶活性测定方法，包括标准曲线的制作、细菌亚硝酸盐还原酶的提取、测定过程中所用的反应混合液的配制、细菌亚硝酸盐还原酶促反应及细菌亚硝酸盐还原酶活性的测定，即通过多孔板和酶标仪测定反应前、后亚硝酸盐溶液吸光值并根据标准曲线可测得酶促反应前、后NaNO2含量，再通过酶活力计算公式计算待测细菌亚硝酸盐还原酶的活力。本发明的一种细菌亚硝酸还原酶活性测定方法，在酶促反应后采用多孔板和酶标仪分析方法，即节省分析试剂的用量，同时节省人力和测试时间，大大提高了检测效率。
一种细菌亚硝酸盐还原酶活性测定方法

[发明专利]一种蚯蚓抗菌肽生物农药及应用-CN201010278565.8无效
发明人： 龚钢明;王忠豪 -专利权人： 龚钢明
申请日： 2010-09-10 - 公布日： 2012-04-04 - 主分类号： A01N63/02 文献下载
摘要：本发明提供一种蚯蚓抗菌肽生物农药及应用，属于生物化工领域。技术方案包括：用磷酸盐缓冲液从蚯蚓体腔分泌液及其组织匀浆液中浸提蚯蚓抗菌肽、将浸提液进行离心，超滤，再浓缩制成蚯蚓抗菌肽生物农药。本发明的生物农药能有效用于防治水稻、瓜果蔬菜的病虫害，并且生产工艺简单，生产过程不产生污染。本发明生物农药属于对环境无污染的绿色环境友好产品。尤其适合用于生产无公害有机农产品。
一种蚯蚓抗菌生物农药应用

[发明专利]一种乳酸菌亚硝酸盐还原酶的生产方法-CN201110207974.3无效
发明人： 龚钢明;何婷婷;管世敏;吕玉涛;丁少南 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2011-07-25 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳酸菌亚硝酸盐还原酶的生产方法，即将乳酸菌用MRS液体培养基活化培养2～3代后所得的活化菌种用白菜汁与西红柿汁等组成的种子培养基及发酵培养基培养后获得乳酸菌发酵液，将乳酸菌发酵液用氢氧化钠调pH值至6.3-6.5，再添加0.4～0.6mg/mL亚硝酸钠，37℃培养32～48h后得到的乳酸菌亚硝酸盐还原酶发酵液离心分离收集菌体，再进一步破碎菌体细胞，收上清液，再经沉淀、透析、冷冻干燥等步骤最终得到亚硝酸盐还原酶。本发明的一种乳酸菌亚硝酸盐还原酶的生产方法，不仅生产成本低，而且具有生产工艺简单，操作更加简便等优点。
一种乳酸菌亚硝酸盐还原酶生产方法

[发明专利]一种参薯糖蛋白及制备方法-CN201110138032.4无效
发明人： 龚钢明;将维;何婷婷 -专利权人：上海应用技术学院
申请日： 2011-05-26 - 公布日： 2011-10-19 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明公开一种参薯糖蛋白，属于植物化学中植物活性物质领域。该糖蛋白是从参薯原料中制得。制备方法是采用浸提、浓缩、去杂蛋白、醇析得到粗品糖蛋白，经DEAE-52纤维素柱层析和SephadexG-75柱层析纯化、浓缩、再经冷冻干燥步骤得到参薯糖蛋白。本发明参薯糖蛋白中单糖的组成包括L-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖，该参薯糖蛋白的分子量约为12500Da～14500Da。该糖蛋白可用于制做功能性食品和保健品，还可进一步用以研究其生物活性如降血糖、调节免疫力等生理功能。
一种糖蛋白制备方法

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