本发明提供了一种检测图丽鱼种群的引物组、试剂盒和方法,属于物种分布检测技术领域,所述引物组,包括上游引物、下游引物和荧光探针;所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示,所述荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。所述方法包括以下步骤:1)从待检测环境中采集环境eDNA样本,2)提取所述环境eDNA样本中的DNA获得DNA样本液;3)以所述DNA样本液为模板,用所述引物组进行qPCR扩增,并测定Ct值,根据Ct值判定结果。所述方法能够在不损伤环境和土著鱼类种群前提下,采取环境DNA技术对图丽鱼种群进行快速高效检测。