本发明公开一种马铃薯晚疫病恒温分子检测标记引物及检测方法，所述分子标记引物包括序列表SEQ ID NO：1～3所示的上游引物RAA‑Pi1F、下游引物RAA‑Pi1R和Pi‑Probe探针。发明设计的RAA扩增引物与探针经与NCBI的核酸序列数据库进行比对，确定具有物种特异性。本发明检测方法的灵敏度高，扩增时间为20min时，RAA‑LFD的最低检测下限为1×10‑3fg/μL；扩增时间为25min时，RAA‑LFD的最低检测下限为1×10‑4fg/μL，换算成模板分子拷贝数为27.4copies/mL。
本发明公开一种检测嗜肺军团菌的特异性检测靶标及分子标记引物，检测靶标的核苷酸列如SEQ ID NO：1所示，检测所述靶标的PCR分子标记引物如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示，检测所述靶标的RAA‑LFD引物和特异探针如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示，本发明PCR检测或RAA‑LFD检测，扩增产物序列经测序分析与预期序列的相似度达到100％，而在以马链球菌、无乳链球菌等有害微生物基因组DNA为模板时均无扩增条带，设计的引物特异性好。
本发明公开一种分子标记引物及马铃薯晚疫病鉴定方法，分子标记引物用于鉴定马铃薯晚疫病致病疫霉，所述分子标记如序列表SEQ ID NO：1～6所示。鉴定方法包括如下步骤：提取待测材料组织DNA；使用所示分子标记引物进行PCR扩增；PCR扩增产物用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测。本发明提供的三对引物仅在致病疫霉DNA为模板时能获得阳性扩增条带，扩增产物经测序分析与预期序列的相似度分别为94.96％、97.71％、96.44％，而在以辣椒疫霉等近缘种的基因组DNA为模板时均无克隆条带，引物特异性好，能有效区分近缘种。本发明方法可以检测到没有任何病斑、但是已经染菌的叶片，这对病害防控相当重要。
