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[发明专利]细胞分选用链霉亲和素偶联微泡的冻干制剂和用途-CN201910678283.8有效
发明人：魏卿;肖海蓉;赵梦莲;牛翰婕 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明涉及细胞分选用链霉亲和素偶联微泡的冻干制剂和用途，该冻干制剂包括用胶塞密封的玻璃瓶，玻璃瓶内分装有能够在遇到水性载体液时形成微泡的冻干粉末，并且玻璃瓶内的空间气氛为选自下列的用于包裹到所述微泡中的包埋气体：C3F8、SF6、CF4、N2、CO2、空气；所述微泡与链霉亲和素偶联并且由选自下列的材料构成：聚乙二醇、磷脂、脂肪酸。冻干制剂用于从外周血中分离目标细胞的方法如说明书所详述的，其可从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
细胞选用亲和素偶联微泡制剂用途

[发明专利]制备用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡冻干制剂的方法-CN201910678276.8有效
发明人：许晓椿;魏卿;肖海蓉;牛翰婕;赵梦莲;刘庆喜 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明涉及制备用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡冻干制剂的方法，包括步骤：使磷脂和脂肪酸用有机溶剂溶解，接着旋转蒸发除溶剂，真空干燥；向烧瓶中加水，超声波振荡使形成混悬液；混悬液加聚乙二醇，混匀，加链霉亲和素，室温孵育；将混悬液分装到玻璃瓶中，用胶塞将玻璃瓶半加塞，抽真空、冷冻、升华、干燥，压塞密封；通过针头穿刺胶塞向密塞玻璃瓶内充入包埋气体，得到冻干制剂，其可用于从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
制备用于细胞分选亲和素偶联微泡冻干制剂方法

[发明专利]用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂-CN201910678274.9有效
发明人：许晓椿;魏卿;肖海蓉;赵梦莲;刘庆喜 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明涉及用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂，其为一种存在于水性载体液中的充气微泡悬浮液，其中的微泡与链霉亲和素偶联，微泡直径小于10μm，每1mL充气微泡悬浮液多达10^8个微泡的链霉亲和素偶联微泡，每1mL充气微泡悬浮液中微泡内的包埋气体量为1～200ug。还涉及该液体制剂在从外周血中分离目标细胞的方法中作为分离试剂的用途。液体制剂用于从外周血中分离目标细胞的方法如说明书所详述的，其可从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
用于细胞分选亲和素偶联微泡液体制剂

[发明专利]一种靶向Mesothelin的嵌合抗原受体及其应用-CN202310544654.X在审
发明人： 赵梦莲;马文建;周飒 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2023-05-15 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种以MSLN为靶点的嵌合抗原受体、由其制备的CAR‑T细胞及其应用。所述由N端到C端顺次包括抗MSLN的Scfv片段、CD8α的铰链区、CD8α跨膜结构域和一个共刺激信号4‑1BB+CD3ζ；氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。本发明制备的分泌Mesothelin抗体的MesoCAR‑T可以显著增强T细胞的特异性杀伤能力，MesoCAR‑T对AML的靶向杀伤能力的有效性，杀伤48小时，在效靶比1:1时，杀伤效率最高能达到45％，达到为该疗法临床前的研究提供实验基础的意义。
一种靶向 mesothelin 嵌合抗原受体及其应用

[发明专利]CD19-CAR-T细胞及其制备方法-CN202111157897.5有效
发明人：许晓椿;肖海蓉;刘庆喜;魏卿;赵梦莲;房帅 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及CD19‑CAR‑T细胞及其制备方法。一方面，本发明涉及一种编码的嵌合抗原受体，包括作为第一信号的抗原结合结构域、跨膜结构域、作为第二信号的细胞内传导结构域、表达IL‑7和CCL‑17细胞因子的第三信号域、以及分泌中和PD‑1、GM‑CSG的anti‑PD‑1、anti‑GM‑CSF scFv的第四信号域。另一方面，本发明涉及一种CAR‑T细胞，其能够分泌表达IL‑7、CCL17因子和/或PD‑1、GM‑CSF抗体。另一方面，本发明涉及制备CAR‑T细胞的方法，以及它们治疗肿瘤的用途。
cd19 car 细胞及其制备方法

[发明专利]一种肿瘤干细胞获取方法-CN202210180810.4在审
发明人：刘庆喜;肖海蓉;赵梦莲;任倩影 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司;齐鲁理工学院
申请日： 2022-02-25 - 公布日： 2022-07-22 - 主分类号： C12N5/095 文献下载
摘要：本发明提供了一种肿瘤干细胞获取方法，该方法将胶质瘤细胞系进行干性培养，干性培养过程中对细胞进行低温刺激等手段，以激活并扩增起始肿瘤干种子细胞，然后利用干性相关标志物进行分选，分选后培养过程中去除贴壁的无干性特征的胶质瘤细胞，剩余悬浮细胞可进行重复多次的肿瘤球培养即肿瘤干细胞。本发明所述的肿瘤干细胞获取方法可以快速扩增干性较强的细胞，为后期的分选、培养提供大量的肿瘤干种子细胞，本方法适用于大规模肿瘤干细胞库建库使用，以满足常规肿瘤生物医学基础研究、临床研究以及抗肿瘤药物开发等工作需求。
一种肿瘤干细胞获取方法

[发明专利]制备CAR-T细胞的方法-CN202210119944.5有效
发明人：刘庆喜;许晓椿;肖海蓉;魏卿;赵梦莲 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2022-02-09 - 公布日： 2022-04-26 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及制备CAR‑T细胞的方法，该方法包括以下步骤：质粒合成，该质粒是由CD19单链可变区、CD8a铰链区、CD8a跨膜区、4‑1BB信号、CD3ζ的包浆信号、IL‑7、CCL17序列构成；病毒包装，得到慢病毒浓缩液，测定其病毒滴度；T细胞制备，制得T细胞为CD8+T细胞，对其进行激活、转导与扩增，收获CAR‑T细胞。本发明还涉及制备T细胞的方法。本发明呈现如说明书所述优异效果。
制备 car 细胞方法

[发明专利]CAR-T细胞及其制法-CN202111156273.1有效
发明人：刘庆喜;许晓椿;肖海蓉;魏卿;赵梦莲 -专利权人：英科博雅基因科技（天津）有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2021-12-07 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及CAR‑T细胞及其制法。具体地说，一方面，涉及一种编码的嵌合抗原受体，包括作为第一信号的抗原结合结构域、跨膜结构域、作为第二信号的细胞内传导结构域、以及表达IL‑7和CCL‑17细胞因子的第三信号域。本发明还涉及一种重组质粒、一种能够分泌表达IL‑7、CCL17因子和/或PD‑1、GM‑CSF抗体的CAR‑T细胞。本发明呈现如说明书所述优异效果。
car 细胞及其制法

[发明专利]靶向CD19的人源化嵌合抗原受体制备及其应用-CN202010632593.9在审
发明人：魏卿;许晓椿;赵梦莲;刘庆喜;牛翰婕 -专利权人：天津英科赛奥科技有限公司
申请日： 2020-07-03 - 公布日： 2020-10-02 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及靶向CD19的人源化嵌合抗原受体及其制备和应用。具体地，涉及靶向人CD19抗原的人源化慢病毒载体表达质粒的构建，并将其应用于嵌合抗原受体T细胞的制备中，而后将该嵌合抗原受体T细胞在体外增殖试验、细胞表型试验、细胞杀伤实验中验证其效果。本发明CAR序列由前导肽序列、靶向人CD19抗原的单链scFv序列、铰链区、跨膜区结构域和胞内信号传导结构域序列组成。将该嵌合抗原受体构建成慢病毒系统表达载体，并感染免疫细胞，能够在免疫细胞表面表达靶向人CD19抗原的嵌合抗原受体，通过识别肿瘤组织上表达的CD19抗原，达到杀伤肿瘤细胞的作用，实现肿瘤治疗的目的，为治疗癌症提供了一种新型的手段。
靶向 cd19 人源化嵌合抗原受体制备及其应用

[实用新型]用于链霉亲和素偶联微泡分选免疫细胞的注射器-CN201921182614.0有效
发明人：许晓椿;肖海蓉;魏卿;牛翰婕;赵梦莲;刘庆喜 -专利权人：英科博雅基因科技（天津）有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2020-04-28 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本申请涉及用于链霉亲和素偶联微泡分选免疫细胞的注射器，其包括：针桶，其上部设置一向外凸起的通气孔；与密封环连接的推杆；与针桶内壁致密组合的密封环，推拉推杆可使密封环在针桶内移动并可吸推液体；设置于针桶下端的针头接口；以可拆卸和连接的方式与针头接口配合使用的针头；用于以密封方式堵塞通气孔和针头接口的堵帽，密封环厚度大于通气孔孔径。该注射器配合本申请记载的方法、试剂，可用于从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
用于亲和素偶联微泡分选免疫细胞注射器

[实用新型]制备细胞分选用链霉亲和素偶联微泡的冻干制剂的加气罐-CN201921182613.6有效
发明人：肖海蓉;许晓椿;魏卿;赵梦莲;刘庆喜;牛翰婕 -专利权人：英科博雅基因科技（天津）有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本申请涉及制备细胞分选用链霉亲和素偶联微泡的冻干制剂的加气罐，其包括：桶体；可拆卸和密封桶体的顶盖；轴杆；三通阀门，分别用于连接抽气机和包埋气体贮罐；用于搁置玻璃瓶的置物盘；用于向下挤压处于半加塞状态的玻璃瓶胶塞，使玻璃瓶密塞的压塞板。该加气罐配合本申请记载的方法、试剂，可用于从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。使用该加气罐制备本申请记载的冻干制剂时，不但不会损伤胶塞，而且工作效率大大提高。
制备细胞选用亲和素偶联微泡制剂加气罐

[发明专利]从外周血中直接分离目标细胞的方法-CN201910678272.X在审
发明人：魏卿;肖海蓉;赵梦莲;牛翰婕 -专利权人：英科博雅基因科技（天津）有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2019-10-22 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及从外周血中直接分离目标细胞的方法。包括步骤：将外周血置于试管内，添加用生物素标记的目标细胞特异性抗体，混匀，孵育，使目标细胞被特异性抗体标记；添加链霉亲和素偶联微泡，混匀，孵育，使目标细胞进一步被微泡标记，添加磷酸盐缓冲液稀释；离心使目标细胞分离，结合了特异性抗体和微泡的目标细胞浮于液体上层，而非目标细胞沉于下部；吸取包含目标细胞的上层液体，即得。该方法可从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
目标细胞外周血特异性抗体微泡直接分离孵育混匀磷酸盐缓冲液链霉亲和素生物素标记造血干细胞免疫细胞上层液体细胞纯度仪器设备靶细胞磁珠法荧光素试管磁珠分选流式偶联失活稀释简易残留上层引入

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