本发明涉及一种梨多酚氧化酶PpyPPO4基因属于植物分子生物学和基因工程技术领域，提供了一种梨多酚氧化酶PpyPPO4基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。根据PpyPPO4基因全长序列设计VIGS引物，以高褐变品种‘威宁大黄梨’果实cDNA为模板，PCR扩增PpyPPO4基因的截断片段，截断片段核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；将截断片段与pTRV2‑VIGS载体相连，构建pTRV2‑PpyPPO4‑VIGS载体。通过VIGS瞬时转化技术可以显著降低易褐变品种‘威宁大黄梨’果实的PPO酶活及褐变。本发明构建的PpyPPO4基因VIGS载体可以显著抑制砂梨果实的酶促褐变，可利用基因工程基因干涉或敲除该基因，在水果低褐变或不褐变的分子育种中发挥重要作用。
本发明公开了一种与砂梨抗黑斑病紧密相关的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，以及由该基因编码的蛋白质，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。还公开了该基因的鉴定方法，包括：步骤1，抗黑斑病和感黑斑病亲本及其杂交F1代梨黑斑病接种；步骤2，利用转录组、蛋白组测序技术进行抗病品种和感病品种接种梨黑斑病叶片的差异基因和差异蛋白分析，结合SLAF‑seq测序技术对其杂交F1代的抗病池和感病池进行Super BSA分析，筛选砂梨抗黑斑病紧密相关的候选基因；步骤3，候选基因功能解析。利用该鉴定方法能够准确鉴定砂梨抗黑斑病紧密相关基因，为砂梨抗黑斑病分子育种和抗黑斑病机理的研究奠定理论基础。
本发明公开了一种用于鉴定砂梨品种黑斑病的SNP标记，属于果树分子遗传育种技术领域，包括如下步骤：1）提取待测梨基因组DNA；2）以待测梨的基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增反应；3）检测PCR扩增产物；经序列比对在S83.0_275630处碱基为鉴定砂梨品种黑斑病的高感品种或高抗品种的SNP标记；引物对为正向引物S83‑F,SEQ ID NO.1，反向引物S83‑R,SEQ ID NO.2。使用本方法筛选的鉴定砂梨品种抗黑斑病的SNP分子标记可以为砂梨抗黑斑病分子育种和抗黑斑病机理的研究奠定理论基础。
