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[发明专利]一种全悬浮细胞培养生产猪伪狂犬病毒抗原的方法-CN201910376694.1有效
发明人：董彦鹏;肖澄;钱建宁;罗顺;姜平;缪芬芳;张业忻;车巧林;王嘉琪;胡芳;沈燕;胡静雅;王彦奇;柴玮迹;耿晓眉 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司;甘肃健顺生物科技有限公司
申请日： 2019-05-07 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种全悬浮细胞培养生产猪伪狂犬病毒抗原的方法，该方法可以大量降低生产成本，无需载体和血清，生产过程更为简便，无需细胞驯化或换液操作，且该工艺占地小，可迅速进行规模化生产，对环境要求较低，自动化程度高，人工成本少，生产批间差异小，质量稳定易于控制，可明显提高产品的产量及质量。一种全悬浮细胞培养生产猪伪狂犬病毒抗原的方法，包括如下步骤：(1)种子细胞的培养及传代；(2)种子细胞的接毒；(3)病毒的收获和含量测定；其中，步骤(1)中，种子细胞为PK‑15B1，步骤(2)中，种毒为PRV ZJ011G，各步骤培养采用无血清细胞培养基CD PK15 259。
一种悬浮细胞培养生产狂犬病毒抗原方法

[发明专利]一种猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组蛋白、单克隆抗体及应用-CN202310431720.2在审
发明人：李玉峰;张宝戈;缪芬芳;车巧林;胡静雅 -专利权人：南京农业大学;江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2023-04-21 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组蛋白、单克隆抗体及应用，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQNO.1；所述杂交瘤细胞用于生产针对猪圆环病毒3型Cap蛋白的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCNO：C2022379；所述HRP酶标单抗由如上述的单克隆抗体通过HRP酶标制得，所述阻断ELISA方法为使用上述的重组蛋白进行抗原包被，所述阻断ELISA方法使用上述的HRP酶标单抗进行检测抗体作用。本发明的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率，可用于后期进行PCV3抗体的检测，为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供了技术支持。
种猪圆环病毒 cap 蛋白重组单克隆抗体应用

[发明专利]一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法-CN202111343768.5有效
发明人：车巧林;肖澄;周琳;张秋萍;董彦鹏;余姣;缪芬芳;沈晓红;巫泉 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-11-14 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法，属于兽医生物学技术领域。本发明所述的鸡滑液囊支原体培养基由基础培养基和辅助培养基组成，其中：基础培养基主要成分有Hank′s浓缩液、乳蛋白水解物、酵母提取物、牛心浸粉、海藻糖，可以通过高压蒸汽灭菌方式除菌；辅助培养基由精氨酸、丙酮酸钠、辅酶Ι、青霉素和猪血清组成，辅助培养基各成分过滤除菌。本发明培养基培养的鸡滑液囊支原体滴度达1010～1011CCU/ml，培养时间14～24h，猪血清含量低至5％，大大降低了异源体对鸡的应激反应和企业生产成本。用该培养基培养的鸡滑液囊支原体制备的灭活疫苗，其安全性和免疫原性均良好。
一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法

[发明专利]一种猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒纯化方法-CN202310726223.5在审
发明人：胡静雅;周琳;缪芬芳;沈燕 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2023-06-19 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒纯化方法，涉及病毒纯化技术领域，包括以下步骤：(1)收集猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒液，离心，取上清；(2)向猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒液中添加PEG，搅拌，离心处理，得到沉淀物；(3)将沉淀物添加PBS溶液中，搅拌，得到猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒混合液；(4)对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒混合液进行多级过滤处理，得到过滤液；(5)将过滤液进行层析色谱纯化处理，经过浓缩，收集纯化物，最后进行过滤处理，即可；本发明提供了一种猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒纯化方法，本发明通过对纯化方法进行了一系列的优化，使得纯化处理后的病毒粒子纯度更高，结构完整，具有良好的免疫原性。
种猪繁殖呼吸障碍综合征病毒纯化方法

[发明专利]一种胸膜肺炎放线杆菌ApxIV蛋白单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒-CN202111065245.9有效
发明人：李玉峰;董彦鹏;于栋;蔡金双;肖澄;周琳;缪芬芳;车巧林 -专利权人：南京农业大学;江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-09-11 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N5/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株胸膜肺炎放线杆菌ApxIV蛋白制备的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体以及制备的用于检测胸膜肺炎放线杆菌的阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被酶标版，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCCNO:C2021112，所述胸膜肺炎放线杆菌ApxIV蛋白单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株所分泌，所述包被酶标板以ApxIV蛋白作为包被抗原。本发明的试剂盒以阻断ELISA法为原理，检测胸膜肺炎放线杆菌，具有灵敏性和特异性高，重复性好，检测快速方便，易于标准化等优点，非常方便。
一种胸膜肺炎放线杆菌 apxiv 蛋白单克隆抗体及其阻断 elisa 试剂盒

[发明专利]一种间接ELISA方法-CN202310292571.6在审
发明人：高新乐;李玉峰;耿琰;车巧林;缪芬芳;胡静雅 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司;南京农业大学
申请日： 2023-03-23 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种间接ELISA方法，所述间接ELISA方法用于检测猪血清样品中的ApxI毒素抗体水平，所述间接ELISA方法包括如下步骤：步骤S1：准备抗原；步骤S2：确定所述ELISA方法的条件；步骤S3：测定阳性标准品获得OD450nm的平均值X和标准差S，确定所述间接ELISA方法的阴阳性临界值；步骤S4：测定待测样品。本发明通过对抗原包被浓度、血清稀释度和作用时间、酶标二抗稀释浓度和作用时间、抗原抗体结合时间、封闭时间、底物显色时间等条件的优化，使其能有效的检测免疫APP疫苗后血清抗体。
一种间接 elisa 方法

[发明专利]一种副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒-CN202210269966.X在审
发明人：李玉峰;董彦鹏;叶洋;伭婷;缪芬芳;车巧林;胡静雅;周琳;肖澄 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2022-03-18 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： C12N5/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白制备的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体以及制备的用于检测副猪嗜血杆菌的阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被酶标版，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C202230，所述副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株所分泌，所述包被酶标板以MnSOD蛋白作为包被抗原。本发明的试剂盒以阻断ELISA法为原理，检测副猪嗜血杆菌，具有灵敏性和特异性高，重复性好，检测快速方便，易于标准化等优点，非常方便。
一种嗜血杆菌 mnsod 蛋白单克隆抗体及其阻断 elisa 试剂盒

[发明专利]猪链球菌、副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗及制备方法-CN202111064980.8在审
发明人：余姣;肖澄;周琳;车巧林;缪芬芳;董彦鹏;沈晓红;张志华 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-09-11 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了猪链球菌、副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗及其制备方法，包括抗原和佐剂；所述抗原包括副猪嗜血杆菌血清4型YC株、副猪嗜血杆菌血清5型SQ株、猪链球菌2型NT株和猪链球菌9型CZ株的灭活抗原浓缩液。本发明提供的疫苗可同时预防由副猪嗜血杆菌引起的副猪嗜血杆菌病和猪链球菌引起的猪链球菌病及两者的混合感染，疫苗副作用小，安全性好，可达到一针多防的效果，尤其可以防治如今流行的血清型病菌的感染，包括副猪嗜血杆菌4型、5型和猪链球菌2型、9型的感染。
链球菌嗜血杆菌二联疫苗制备方法

[发明专利]猪圆环病毒2b型和2d型的二价亚单位疫苗及其制备方法-CN202111428954.9在审
发明人：承南;肖澄;周琳;缪芬芳;董彦鹏;胡静雅;胡芳;朱盼盼;巫泉 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-11-28 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及猪圆环病毒2b型和2d型的二价亚单位疫苗及其制备方法。本发明提供一种重组杆状病毒，其包含一个或多个拷贝的猪圆环病毒2b型或2d型的Cap蛋白编码基因。本发明还提供猪圆环病毒2b型和2d型的二价亚单位疫苗，其包含采用所述重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2b型或2d型的Cap蛋白。本发明通过人工密码子优化，实现了猪圆环病毒2b型或2d型的Cap蛋白的高水平、高纯度表达，保证了Cap蛋白的天然结构和免疫原性。本发明提供的猪圆环病毒2b型和2d型的二价亚单位疫苗具有高度的免疫原性和安全性，对猪圆环病毒发挥优异的免疫保护效果。
圆环病毒二价单位疫苗及其制备方法

[发明专利]一种表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒、制备方法及应用-CN202111343755.8在审
发明人：施丽薇;肖澄;周琳;缪芬芳;董彦鹏;胡静雅;胡芳;朱盼盼 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-11-13 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C07K14/015 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒、制备方法及应用，所述重组杆状病毒的保藏编号为：CCTCCNo:V202178。本发明通过将毒株的VP2基因克隆至载体pVL1392中，将重组质粒和flashBac‑ultra杆状病毒基因共转染sf9细胞，获得表达VP2蛋白的重组杆状病毒。猪细小病毒VP2蛋白重组杆状病毒疫苗能够诱导较强的免疫应答，能提供针对猪细小病毒的临床保护并抑制病毒在机体内的复制，其免疫原性与保护效力和商品疫苗相当。该方法制备VP2蛋白简便、生产周期短、免疫效力强。
一种表达细小病毒 vp2 蛋白重组杆状病毒制备方法应用

[发明专利]一种多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒-CN202111167382.3在审
发明人：董彦鹏;李玉峰;王天宇;肖澄;周琳;胡静雅;车巧林;缪芬芳 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-10-06 - 公布日： 2022-01-28 - 主分类号： C07K16/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被酶标版，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C2021111，所述多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株所分泌，所述包被酶标板以多杀性巴氏杆菌毒素C端截短蛋白作为包被抗原。本发明的试剂盒以阻断ELISA法为原理，检测产毒素型多杀性巴氏杆菌，具有灵敏性和特异性高，重复性好，检测快速方便，易于标准化等优点，非常方便。
一种多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体及其阻断 elisa 试剂盒

[发明专利]一种猪链球菌9型高密度发酵培养基及其制备方法、应用-CN202110703664.4在审
发明人：余姣;肖澄;周琳;车巧林;沈晓红;董彦鹏;缪芬芳;谢洁;张志华 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2021-06-24 - 公布日： 2021-10-22 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪链球菌9型高密度发酵培养基及其制备方法、应用，包括基础培养基和培养基添加剂，基础培养基中包括以下组分：胰蛋白胨、酵母粉、牛肉粉、硫酸铵、葡萄糖、七水合硫酸镁、三水合磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、剩余组分为纯水；培养基添加剂为马血清或牛血清；培养基添加剂按照所述基础培养基体积的2％～15％，与所基础培养基混合，得到猪链球菌9型高密度发酵培养基。使用本发明的猪链球菌9型高密度发酵培养基培养猪链球菌9型，有利于细菌的生长繁殖，培养的活菌滴度高。
种猪链球菌高密度发酵培养基及其制备方法应用

[发明专利]一种全悬浮细胞培养生产猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的方法-CN201910376687.1在审
发明人：董彦鹏;肖澄;缪芬芳;车巧林;姜平;白娟;胡芳;胡静雅;耿晓眉;谢洁 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2019-05-07 - 公布日： 2019-09-17 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种全悬浮细胞培养生产猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的方法，该方法使用生物反应器全悬浮无血清培养生产PRRSV抗原，制备灭活疫苗，该方法可以大量降低生产成本，可明显提高制品的产量及质量。一种全悬浮细胞培养生产猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的方法，该方法包括如下步骤：(1)种子细胞的培养；(2)种子细胞的接毒；(3)病毒的收获和含量测定；其中，种子细胞为Marc‑145，并采用无血清细胞培养基Marc401在反应器中进行培养。
细胞培养全悬浮猪繁殖与呼吸综合征病毒种子细胞抗原无血清细胞培养基生产制备灭活疫苗生物反应器无血清培养方法使用含量测定反应器病毒收获

[发明专利]一种猪圆环病毒2型的ELISA抗原检测试剂盒及其检测方法-CN201910385538.1在审
发明人： 缪芬芳;肖澄;董彦鹏;徐凤;胡静雅;车巧林;周琳;耿晓眉;谢洁 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2019-05-09 - 公布日： 2019-09-06 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明提供了一种猪圆环病毒2型的ELISA抗原检测试剂盒，其能解决现有疫苗的效力检测方法费时费力，并且需要免疫的技术问题。一种猪圆环病毒2型的ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于：ELISA抗原检测试剂盒包括包被板、阳性质控血清、阴性质控血清、对照样品、酶标二抗、样品稀释液、洗涤液、显色液和终止液；包被板由猪圆环病毒2型抗原包被，猪圆环病毒2型抗原为猪圆环病毒2型灭活培养物纯化后的猪圆环病毒2型全病毒蛋白；对照样品为猪圆环病毒2型参考疫苗，猪圆环病毒2型参考疫苗为猪圆环病毒2型灭活培养物与佐剂混合制成。该试剂盒将疫苗中蛋白含量与对照样品进行比较，无需对试验动物进行免疫。
猪圆环病毒2型抗原检测试剂盒对照样品圆环病毒疫苗种猪猪圆环病毒2型抗原包被板血清灭活蛋白培养物纯化样品稀释液酶标二抗试验动物阳性质控阴性质控参考培养物全病毒试剂盒洗涤液显色液终止液检测包被佐剂费力

[发明专利]一种猪肺炎支原体抗原浓缩纯化的方法-CN201910576309.8在审
发明人：车巧林;肖澄;郁伟军;徐凤;董彦鹏;缪芬芳;耿晓眉;余姣;胡静雅 -专利权人：江苏南农高科技股份有限公司
申请日： 2019-06-28 - 公布日： 2019-08-23 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明针对猪肺炎支原体抗原杂蛋白去除率和抗原回收率不理想，同时存在外源病毒抗体和免疫原性较差等技术问题，提供一种可以解决现有技术缺陷的猪肺炎支原体抗原浓缩纯化的方法。一种猪肺炎支原体抗原浓缩纯化的方法，包括以下步骤：(1)将猪肺炎支原体抗原培养液进行超滤浓缩，(2)将步骤(1)得到的超滤浓缩液进行洗滤；步骤(1)中超滤浓缩采用中空纤维膜过滤系统，中空纤维膜孔径为750KD或0.1μm，超滤浓缩剪切速率为2000～6000sec‑1、跨膜压为0～10psi；步骤(2)中洗滤采用等体积动态平衡洗滤(即加入洗滤液的速率与透过端流出液的速率相同)，洗滤液为不含血清的猪肺炎支原体培养基基础液。
猪肺炎支原体超滤浓缩抗原洗滤肺炎支原体抗原种猪培养液中空纤维膜过滤浓缩超滤浓缩液培养基基础杂蛋白去除中空纤维膜病毒抗体技术缺陷抗原浓缩免疫原性动态平衡剪切流出液血清膜压外源回收率

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