本发明涉及羟基类固醇脱氢酶，具体涉及7α‑羟基类固醇脱氢酶St‑2‑2的突变体R16Q。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的7α‑羟基类固醇脱氢酶的第16位氨基酸由Arg定点突变为Gln所得。所述突变体在相同底物TCDCA和NADP+的存在下，酶活是野生型酶的4.35倍，在生物转化TCDCA获取TUDCA的过程中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及羟基类固醇脱氢酶，具体涉及7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体J‑1‑1△C6及其应用。本发明提供一种7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，是由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的7α‑羟基类固醇脱氢酶的C‑端截短6个氨基酸所得。该突变体具有底物选择性，能够专一性催化CDCA及其牛磺酸或甘氨酸缀合物，对于CA及其牛磺酸或甘氨酸缀合物没有催化活性，可用于从复杂底物鸡胆粉中高效合成TUDCA，而不产生有毒物质即副产物TUCA，在特异性生物转化TCDCA获取TUDCA的过程中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及羟基类固醇脱氢酶，具体涉及7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体St‑2‑2△C10及其应用。本发明提供一种7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，是由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的7α‑羟基类固醇脱氢酶的C‑端截短10个氨基酸所得。该突变体具有底物选择性，能够专一性催化CDCA及其牛磺酸或甘氨酸缀合物，对于CA及其牛磺酸或甘氨酸缀合物没有催化活性，可用于从复杂底物鸡胆粉中高效合成TUDCA，而不产生有毒物质即副产物TUCA，在特异性生物转化TCDCA获取TUDCA的过程中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及羟基类固醇脱氢酶，具体涉及一种专一性催化CDCA及其缀合物的酶及其应用。本发明提供一种7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，是由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的7α‑羟基类固醇脱氢酶的C‑端截短8个氨基酸所得。该突变体具有底物选择性，能够专一性催化CDCA及其牛磺酸或甘氨酸缀合物，可用于血清中总CDCA的检测，在肝胆疾病的临床诊断和预后中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及苏氨酸醛缩酶，具体涉及一种L‑苏氨酸醛缩酶突变体R318L及其应用。所述L‑苏氨酸醛缩酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的L‑苏氨酸醛缩酶的第318位氨基酸由Arg变为Leu所得。该突变体在催化3,4‑二羟基苯甲醛和甘氨酸合成屈昔多巴[L‑苏式‑(3，4‑二羟基)苯基丝氨酸]的反应中具有84.9％的非对映选择性，是野生型的2.8倍，在屈昔多巴的生物合成中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及苏氨酸醛缩酶，具体涉及一种L‑苏氨酸醛缩酶突变体R318M及其应用。所述L‑苏氨酸醛缩酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的L‑苏氨酸醛缩酶的第318位氨基酸由Arg变为Met所得。该突变体在催化3,4‑二羟基苯甲醛和甘氨酸合成屈昔多巴[L‑苏式‑(3，4‑二羟基)苯基丝氨酸]的反应中具有77.1％的非对映选择性(de)，是野生型的2.5倍多，在生物合成屈昔多巴的工业生产中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及苏氨酸醛缩酶，具体涉及一种L‑苏氨酸醛缩酶突变体R318V及其应用。所述L‑苏氨酸醛缩酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的L‑苏氨酸醛缩酶的第318位氨基酸由Arg变为Val所得。该突变体在催化3,4‑二羟基苯甲醛和甘氨酸合成屈昔多巴[L‑苏式‑(3，4‑二羟基)苯基丝氨酸]的反应中具有79.9％的非对映选择性(de)，是野生型的2.6倍多，在生物合成屈昔多巴的工业生产中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及羟基类固醇脱氢酶，具体涉及7α‑羟基类固醇脱氢酶St‑2‑2的突变体T15G、T15S和T15A。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2，3或4所示，是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的7α‑羟基类固醇脱氢酶的第15位氨基酸由Thr定点突变为Gly、Ser或Ala所得。所述突变体在相同底物TCDCA和NADP+的存在下，酶活分别是野生型的3.18、4.27、7.85倍，在生物转化TCDCA获取TUDCA的过程中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及羟基类固醇脱氢酶，具体涉及7α‑羟基类固醇脱氢酶(St‑2‑2)突变体。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2，3，4，5，6，7，8，9或10所示，是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的7α‑羟基类固醇脱氢酶的第255位氨基酸由Ile变为Tyr、Gln、Leu、Thr、Gly、Asn、Ser、Ala或Phe所得。所述突变体在相同底物TCDCA和NADP+的存在下，酶活分别是野生型的1.49、1.78、1.79、1.79、1.93、2.44、2.58、2.97、3.34倍，在生物转化TCDCA获取TUDCA的过程中具有巨大的应用潜力。
本发明涉及L‑苏氨酸醛缩酶及其编码基因与应用，属于生物技术领域。所述L‑苏氨酸醛缩酶，为SEQ ID NO.1所示的蛋白，或将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加所获得的功能相同的蛋白。所述L‑苏氨酸醛缩酶能够以3‑/4‑位羟基取代的苯甲醛为底物，以5‑磷酸吡哆醛为辅酶，以甘氨酸为辅底物，在适当的条件和介质内进行酶催化反应，生物合成屈昔多巴(L‑threo‑DOPS)，该方法的非对映选择性能达到30％。本发明具有较高选择性的L‑苏氨酸醛缩酶对于屈昔多巴生物催化具有重要的意义。
