本发明公开了一种壳聚糖结合域氨基酸序列的应用及酿酒酵母孢子固定化酶的方法，所述应用为利用所述壳聚糖结合域氨基酸序列在酿酒酵母孢子固定化酶中的应用，所述壳聚糖结合域氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次选择来源于Paenibacilus sp.IK‑5壳聚糖酶的壳聚糖结合区域CBM32作为运载蛋白，利用CBM32与dit1Δ孢子壁壳聚糖层的亲和能力，实现酶蛋白在dit1Δ孢子中的固定化；本发明解决了以往孢子固定化酶活性低，重复使用能力差的问题。
本发明公开了一种壳聚糖亲和蛋白、酶的固定化方法及生物材料，所述壳聚糖亲和蛋白为由核苷酸序列SEQ ID NO.1编码的野生型壳聚糖酶经过其氨基酸第54位定点突变而产生的突变体，所述突变体为壳聚糖酶的突变体E54Q。本发明利用所述壳聚糖亲和蛋白与dit1Δ孢子壁壳聚糖层的亲和能力，实现酶蛋白在dit1Δ孢子中的固定化；本发明方法操作简便，不需要购买商品酶，大大降低了生产成本，且绿色环保，可大量制备并能重复使用。
本发明涉及一种γ‑氨基丁酸高产生物制备法。γ‑氨基丁酸的生物合成方法具有后处理简便、产品安全性能高的优点。为了提供一种γ‑氨基丁酸的高产生物制备法，本发明设计对野生型谷氨酸脱羧酶进行优化，通过物理诱导获得谷氨酸脱羧酶的正向突变体，并筛选其中的高活性区域以获得一种序列更加简短的谷氨酸脱羧酶突变体。基于上述设计思路，本发明提供了SEQ ID NO:1‑6所示氨基酸序列的谷氨酸脱羧酶突变体，相比野生型在酶催化效率、稳定性等方面具有显著的提升，应用于γ‑氨基丁酸的工业生产具有重要意义。
本发明属于基因工程领域，涉及一种毕赤酵母中提高碱性脂肪酶分泌效率及酶活的方法，本发明的碱性脂肪酶LIP1碱基序列如SEQ ID NO:1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明基于组合优化策略对脂肪酶LIP1依次经过密码子偏好性优化、基因多拷贝积累、更换分泌作用更强的信号肽以及分子伴侣共表达等优化提高其在毕赤酵母中的分泌效率及酶活，实现脂肪酶LIP1在重组酵母中高效表达和积累。
