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[发明专利]一种细胞培养物蛋白质表达量及电荷异质性的同步检测方法及系统-CN202310867789.X在审
发明人：卞立晴;孙强祖;苗振华;李倩;张凡;张晞晨 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2023-07-14 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种细胞培养物蛋白质表达量及电荷异质性的同步检测方法及系统，涉及蛋白质检测技术领域。具体而言，包括如下步骤：将细胞培养物依次进行梯度洗脱和色谱检测，其中，色谱柱采用串接的亲和色谱柱和离子交换色谱柱。本发明的同步检测解决了现有技术中关于同步检测抗体滴度和电荷异质性的空白，提高传统分析模式的效率；本发明的同步检测方法所耗费的样品量更少、耗时更短、所需人力与仪器资源更少，同步检测系统的结构简单、操作便捷。
一种细胞培养蛋白质表达电荷异质性同步检测方法系统

[发明专利]一种调控抗体糖型的方法及其应用-CN202211165580.0在审
发明人：管叙龙;章柳泽;王克波;钱媛媛;杨晓明;张晞晨 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2022-09-23 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种调控抗体糖型的方法及其应用。所述的调控抗体糖型的方法，包括以下步骤：在表达抗体的细胞培养过程中添加糖型调节剂；所述糖型调节剂包括：岩藻糖、氯化铵、N‑乙酰氨基葡萄糖以及2‑脱氧‑2‑氟‑D‑半乳糖中的至少一种。所述的调控抗体糖型的方法，能够显著提高G0F比例和降低G1F与G2F比例，所用糖型调节剂易于采购，该方法简单易操作，还可以根据需求适当调整添加浓度，适于抗体药物开发过程半乳糖基化的调控，尤其是G0F、G1F与G2F的比例。
一种调控抗体方法及其应用

[发明专利]细胞培养用缓冲液及其制备方法和细胞培养方法-CN202210771319.9在审
发明人：代争;张国锋;贺敏;王克波;杨晓明;叶峰 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2022-06-30 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种细胞培养用缓冲液及其制备方法和细胞培养方法。细胞培养用缓冲液，包括氨基酸、氢氧化钠和水；所述氨基酸包括丙氨酸、γ‑氨基丁酸、丝氨酸、色氨酸和酪氨酸；所述缓冲液中，所述丙氨酸的浓度为10～15mM/L，所述γ‑氨基丁酸的浓度为10～15mM/L，所述丝氨酸的浓度为10～20mM/L，所述色氨酸的浓度为80～85mM/L，所述酪氨酸的浓度为200～250mM/L；所述氢氧化钠的浓度为0.75～0.85mol/L；所述缓冲液的pH为11～11.4。细胞培养用缓冲液可有效地将细胞培养中的pH控制在合适范围内，对细胞生长和代谢无负面影响，还可以提高蛋白产量。
细胞培养缓冲液及其制备方法

[发明专利]一种自动控制连续层析上样载量的方法和层析方法-CN202210641853.8在审
发明人：张赶;徐晓渊;彭亚明;杨晓明;叶峰;张晞晨 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2022-06-07 - 公布日： 2022-08-02 - 主分类号： B01D15/14 文献下载
摘要：本发明涉及抗体纯化技术领域，具体而言，涉及一种自动控制连续层析上样载量的方法和层析方法。所述自动控制连续层析上样载量的方法包括如下步骤：将样品上样至层析装置的层析柱后，检测流穿所述层析柱的流穿液的紫外吸收值，待所述紫外吸收值平稳时，记录该紫外吸收值作为基准值；继续检测所述流穿液的紫外吸收值，当所述紫外吸收值与所述基准值的差值大于5mAu时，切换所述层析柱。通过检测并观察流穿液的紫外吸收值的变化来自动控制单根层析柱的上样量，该方法具有大幅提高填料的载量利用率、降低缓冲液消耗、提升生产率、操作简单和降低生产成本等优点。
一种自动控制连续层析上样载量方法

[发明专利]蛋白纯化的系统和方法-CN202010460856.2有效
发明人：倪楠;张赶;梁泊宁;杨晓明;叶峰 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2020-05-27 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白质纯化技术领域，尤其是涉及一种蛋白纯化的系统和方法。蛋白纯化的系统，包括深层过滤单元、层析单元和蠕动泵；所述蠕动泵的蠕动泵管的出口连接于所述深层过滤单元的入口；所述深层过滤单元的出口连接于所述层析单元的入口；所述层析单元包括层析膜和/或层析柱；所述深层过滤单元包括深层过滤膜；所述深层过滤膜的膜面积与所述层析膜的膜体积之比为1m2﹕(100～110)mL；所述深层过滤膜的膜面积与所述层析柱的柱体积之比为1m2﹕(0.8～10)L。本发明通过采用深层过滤膜与层析膜和/或层析柱配合，可同时处理多个步骤，极大的提高了生产效率；并且，无需采用现有的全自动化的层析系统，降低了生产成本。
蛋白纯化系统方法

[发明专利]抗DKK2抗体、包含该抗DKK2抗体的组合物及其用途-CN202011402397.9有效
发明人：刘大有;黄光诚 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2020-12-02 - 公布日： 2022-04-26 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本公开涉及人源化的并且CMC特性改善的抗DKK2抗体，包含所述抗体的组合物，以及使用所述抗体或所述组合物来治疗疾病的方法。
dkk2 抗体包含组合及其用途

[发明专利]动物细胞灌流培养的方法-CN201911312999.2有效
发明人：罗颖娣;薛圣杰;郑军洁;黄光诚;杨晓明 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2019-12-18 - 公布日： 2022-01-21 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程的细胞培养技术领域，尤其是涉及一种动物细胞灌流培养的方法。该灌流培养的方法包括：动物细胞接种于生物反应器中进行批培养至第2～3天，进行灌流培至第30～35天；起始谷氨酰胺、葡萄糖的浓度分别为2～4mM、6～10g/L；体系中谷氨酰胺的浓度低于0.5～2.5mM和/或葡萄糖的浓度低于1～4.5g/L时，调整所述灌流速率至1.2～2RV/day；当调整所述灌流速率至1.2～2RV/day后，体系中谷氨酰胺的浓度低于0.5～2.5mM和/或葡萄糖的浓度低于1～4.5g/L时，提高灌流培养的培养基中谷氨酰胺及葡萄糖的浓度。本发明的培养方法极大的提高了细胞密度、细胞活率和单位体积产率。
动物细胞灌流培养方法

[发明专利]一种降低抗体半乳糖基化的方法-CN202110825502.8在审
发明人：代争;张国锋;郑军洁;杨晓明;叶峰 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2021-07-21 - 公布日： 2021-10-26 - 主分类号： C12P21/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种降低抗体半乳糖基化的方法，涉及生物技术领域。包括：在培养表达所述抗体的细胞的过程中使用半乳糖类似物，所述半乳糖类似物选自式(1)的化合物或其生物学可接受的盐，其中，R1、R2、R4分别独立地选自卤素或‑OH中的一种；R3选自‑OH或‑OAc。本发明方法在细胞培养过程中添加一定浓度的半乳糖类似物，能够有效、稳定地调控半乳糖基化，使各糖型比例控制在目标水平附近。
一种降低抗体半乳糖方法

[发明专利]基于肽图的单抗糖型检测方法-CN202110363306.3在审
发明人：张庆鸿;骆建;施立明;杨晓明;叶峰 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2021-04-02 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明涉及化学分析检测技术领域，尤其是涉及一种基于肽图的单抗糖型检测方法。基于肽图的单抗糖型检测方法，包括如下步骤：(a)采用超高压液相色谱‑质谱采集肽图试样的质谱信号，获取不同糖型修饰的糖肽的分子量；(b)对照含有各种糖型修饰的糖肽的分子量的数据库，确定所述不同糖型修饰的糖肽所对应的糖型；所述肽图试样的制备包括：在液相环境中，采用变性剂和还原剂对单抗样品进行变性处理；再进行烷基化处理和酶切反应，然后终止酶切反应。本发明基于单抗样品的肽图分析单抗的糖型，解决了现有技术无法兼顾糖型分析效率和分析精度的技术问题。
基于单抗糖型检测方法

[发明专利]高密度接种培养中种子细胞的培养方法及其应用-CN201811531122.8有效
发明人：代争;廖元霆 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2018-12-14 - 公布日： 2021-06-22 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药中哺乳动物细胞培养技术领域，具体而言，涉及高密度接种培养中种子细胞的培养方法及其应用。本发明在N‑1种子细胞培养和后续(可选的)扩大培养中，通过流加补料培养增加活细胞密度。便于放大至生产规模，操作简单，成本低廉；还可以在更短的周期获得相同或更高产量和质量的蛋白，并在相同的生产周期可以获得更高的蛋白产量，可提高＞20％的产量。
高密度接种培养种子细胞方法及其应用

[发明专利]一种细胞培养物中氨基酸的检测方法-CN201811506295.4有效
发明人：张庆鸿;魏昱 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2018-12-10 - 公布日： 2021-06-08 - 主分类号： G01N30/64 文献下载
摘要：本发明涉及化学分析检测技术领域，尤其是涉及一种细胞培养物中氨基酸的检测方法。所述细胞培养物中氨基酸的检测方法，包括如下步骤：将待测细胞培养物离心处理，取上清液，稀释100‑500倍，得到供试样品；通过毛细管电泳‑质谱联用法检测供试样品，得到离子流色谱图；获取供试样品中待测氨基酸的提取离子流色谱图对应的峰面积，代入由对应氨基酸标准品建立的标准曲线中，得到细胞培养物中待测氨基酸的含量。本发明通过对细胞培养物进行一定的预处理，结合毛细管电泳‑质谱联用技术，利用外标法定量，可对细胞培养物中氨基酸含量进行快速检测，针对细胞培养的不同阶段可测试细胞培养物中氨基酸的含量，了解细胞对氨基酸的消耗。
一种细胞培养氨基酸检测方法

[发明专利]采用亲和层析纯化减少抗体聚集的方法-CN202110373715.1在审
发明人：徐晓渊;张赶;梁泊宁;周佳豪;王贵卫;蔡子健;杨晓明;叶峰 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2021-04-07 - 公布日： 2021-06-04 - 主分类号： C07K16/00 文献下载
摘要：本发明涉及抗体纯化技术领域，尤其是涉及一种采用亲和层析纯化减少抗体聚集的方法。采用亲和层析纯化减少抗体聚集的方法，包括如下步骤：采用洗脱缓冲液洗脱亲和层析捕获的目标蛋白；洗脱缓冲液选自pH3.4～3.8的NaAc‑HAc缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和精氨酸缓冲液中的至少一种；NaAc‑HAc缓冲液的浓度为45～100mM，甘氨酸缓冲液的浓度为0.01～1.0M，柠檬酸缓冲液的浓度为20～100mM，精氨酸缓冲液的浓度为0.01～1.0M。本发明提供多种适于亲和层析过程的洗脱缓冲液，可保护目标蛋白，减少亲和层析洗脱后低pH灭活时抗体的聚集，极大的提高目标蛋白的纯度，稳定目标蛋白。
采用亲和层析纯化减少抗体聚集方法

[发明专利]细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法-CN201811558166.X有效
发明人：苗振华;魏昱 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2018-12-19 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： G01N30/46 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白质检测技术领域，尤其是涉及一种细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法和系统。所述检测方法包括如下步骤：细胞培养物经串接的亲和色谱柱和体积排阻色谱柱进行梯度洗脱和检测；梯度洗脱的流动相包括：流动相A：10‑200mM磷酸二氢钠‑磷酸氢二钠混合物，50‑500mM氯化钠，pH 6.8±0.5；流动相B：10‑200mM甘氨酸，20‑300mM氯化钠，pH 2.5±0.5。本发明的检测方法，将亲和色谱柱和体积排阻色谱柱串接，采用一定的流动相进行梯度洗脱，能够同时检测细胞培养物中蛋白质表达量和聚集体百分比，简便、易用、费用低廉，且结果可靠。
细胞培养蛋白质表达聚集体量检测方法

[发明专利]蛋白质药物辅料筛选方法-CN201910301134.X有效
发明人：魏昱;孙强祖 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2019-04-15 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： G16C20/50 文献下载
摘要：本发明提供一种蛋白质药物辅料筛选方法。本发明的蛋白质药物辅料筛选方法包括：提供一种治疗性蛋白以及该治疗性蛋白的多个候选辅料，采用AutoDockTools软件与AggreScan在线软件对辅料与治疗性蛋白之间的解离能量值以及辅料与治疗性蛋白的可能结合位点进行分析，对多个候选辅料进行筛选，筛选得到的结果与常规稳定性实验的结果具有很好的对应关系，证明本发明的蛋白质药物辅料筛选方法的筛选结果稳定可靠，并且该方法操作简便，耗时短，每次辅料筛选仅需1‑2天。
蛋白质药物辅料筛选方法

[发明专利]一种抗体的纯化方法-CN201811332129.7有效
发明人：金雄华;徐志豪;汤炜;梁泊宁 -专利权人： 杭州奕安济世生物药业有限公司
申请日： 2018-11-09 - 公布日： 2021-02-12 - 主分类号： C07K16/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种抗体的纯化方法。一种抗体的纯化方法，包括蛋白A亲和层析步骤；所述蛋白A亲和层析的方法为：在上样之后和用洗脱液洗脱目标抗体之前，先用中间清洗缓冲液洗涤柱床；所述中间清洗缓冲液为：pH值为5‑6，电导率为20‑100mS/cm的缓冲液。本发明通过在蛋白A亲和层析过程中增加中间清洗的步骤提高了对HCP、DNA的去除能力，进而提高了阴离子交换层析去病毒的能力。
一种抗体纯化方法

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