本发明公开了一种催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统及其构建和应用，双酶共固定化系统以金属有机框架为载体，将热稳定双酶AaMaiA和AspB交联到金属有机框架上得到双酶共固定产物AaMaiA/AspB@NH2‑UiO66，热稳定双酶AaMaiA和AspB氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示。本发明双酶共固定化系统对有机试剂耐受，其中还对苯甲醛表现出良好的耐受能力，同时具有良好的重复使用性；与全细胞催化相比对底物马来酸的转化率大大提高，固定化酶的转化率为86.8％。本发明双酶共固定化系统可以避免其他副产物的生成，得到纯度高且产率高的天冬氨酸，降低成本、避免底物浪费，生产过程更为简单。
本发明提供了一种寡核苷酸、载体及制备方法和应用，所述寡核苷酸的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明通过设计研究，成功构建出了用于下调Postn表达量的寡核苷酸。首次利用寡核苷酸分子修复强直性肌营养不良I型的成肌障碍，该寡核苷酸分子通过下调DM1疾病细胞模型中的Postn蛋白表达量，从而达到修复成肌功能障碍的目的。
本发明公开了一种定点突变的水稻隐色素及其构建方法,本发明从基因库中获得基因序列，进行人工密码子优化并且进行蛋白质羧基端截短之后，获得目的基因序列与pET22b质粒连接，构建出重组表达质粒。截短后基因序列如SEQ ID NO:1所示。设计突变引物，利用重组质粒进行定点突变，并将该突变重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出用于水稻隐色素表达的基因工程菌；本发明与现有技术相比，表达的突变体酶D393N的聚合形式发生改变，具有更高的表达量，为体外研究提供了便利；其光还原产生的自由基更多，氧化更缓慢，因此D393N突变体酶有利于其调控水稻的开花周期，使水稻可以趋避利害，进而提高水稻产量。
本发明公开了一种耐热酯酶基因、含有该基因的工程菌及其编码蛋白和应用，该酯酶基因estA'碱基序列为SEQ ID NO.1，将基因estA'与质粒连接构建重组表达载体pET28b‑estA'，表达质粒转化大肠杆菌构建重组工程菌Rosetta(DE3)pLysS/pET28b‑estA'；酯酶在大肠杆菌中获得异源表达，采用对硝基苯酚法鉴定酯酶EstA的酶学性质，具有高度热稳定性，本发明的目的是为该酯酶的生产及其在医药、食品、精细化工等领域的工业应用提供服务，尤其是在需要高温催化时，该酶更为适宜。
本发明公开了一种耐热的酯酶编码基因、载体、工程菌及其编码蛋白的用途，所述的基因具有SEQ ID NO:1所示的碱基序列，本发明与现有技术相比，所述的基因在保障所编码蛋白质不变的前提下，对1257个核苷酸中的937个核苷酸进行了替换，起始密码子ATG，终止密码子TAA；A碱基248个，占比19.7％；T碱基328个，占比26.1％；C碱基299个，占比23.8％；G碱基382个，占比30.4％，GC含量也由菌株中的原始核苷酸占比的75.2％下降至54.2％。所制的基因工程菌在16‑30℃和0.01‑0.1mM IPTG条件下，在大肠杆菌中成功获得异源表达。
本发明公开了一种水稻隐色素定点突变蛋白及其构建方法,本发明从基因库中获得基因序列，进行人工密码子优化并且进行蛋白质羧基端截短之后，获得目的基因序列与pET22b质粒连接，构建出重组表达质粒。截短后基因序列如SEQ ID NO:1所示。设计突变引物，利用重组质粒进行定点突变，并将该突变重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出工程菌；本发明与现有技术相比：表达的突变体酶S392L表达量更高，聚合形式更紧密，为体外研究提供了便利。本发明S393L突变体酶更有利于水稻性状及开花周期的调控。加ATP后，光还原过程中425nm附近峰值上升，有利于农业生产，为改良水稻性状且提高水稻产量提供方向。
