本发明涉及分子生物学特别是小分子蛋白治疗领域,尤其涉及一种微管结合蛋白CRIPT、其治疗性突变体及其应用,所述CRIPT蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其治疗性突变体Antp‑CRIPT‑C3Y的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明重新注解了CRIPT的亚细胞定位,发现其对细胞分裂中期仿锤体的运动起关键调控作用,同时确定了它与微管蛋白相互作用的结合序列和调节序列,确定了一个CRIPT治疗性突变体。小鼠皮下肿瘤模型研究证实,这一突变体能显著抑制肿瘤的生长。因此,CRIPT蛋白和相应靶向分子的研究将为基础科研和临床肿瘤诊断、治疗及新药开发提供新的依据,相关产品具有巨大的市场应用前景。
本发明公开了一种磷酸化抗原多肽、抗体及其制备方法,涉及抗体制备技术领域。本发明包括针对人ERK蛋白202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化抗体,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,其中Thr和Tyr突变为Asp;针对YAP1蛋白127位丝氨酸的磷酸化抗体,其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,其中Ser突变为Asp。本发明通过将磷酸化的氨基酸突变为天冬氨酸,将突变抗原的DNA构建到pGEX‑6p表达载体上,使用大肠杆菌表达GST融合抗原,纯化后的抗原与弗氏佐剂混合后可直接免疫动物,此方法简单、抗原稳定性好,溶解性高且成本低。