本发明公开了一种检测人类红细胞Rh血型基因分型的引物组、试剂盒及应用,所述引物组的序列表如SEQ ID No.1‑9、SEQ ID No.10‑12或/和SEQ ID No.13‑15、SEQ ID No.16‑18或/和SEQ ID No.19‑21、SEQ ID No.22‑24或/和SEQ ID No.25‑27、SEQ ID No.28‑30、SEQID No.31‑33或/和SEQ ID No.34‑36、SEQ ID No.37‑72所示。引物经过了优化设计,具有相似的退火温度,能够实现所有引物在相同的PCR扩增条件下同时扩增,每个PCR反应体系的体积只有1.15μL,DNA模板只需5~10ng,大大增加了检测效率和反应灵敏度;应用该引物组进行检测,具有速度快、成本低、灵敏性高及易于实现多位点联合检测等优点。