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[发明专利]一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂及其应用-CN202211121921.4有效
发明人：陆一鸣;唐雪明;严雪芳;马樱芳 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-09-15 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： A01N63/60 文献下载
摘要：本发明公开了一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，按质量百分比计包括以下组分：烟草花叶病毒核酸干扰素：5‑40％；分散剂：3‑10％；乳化剂：10‑15％；抑菌剂：0.1‑1％；稳定剂：1‑2.5％；结构稳定剂：1‑10％；余量为分散介质；其中：所述烟草花叶病毒核酸干扰素为抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV‑cp(I)‑dsRNA，是可分散油悬浮剂的活性成分。本发明还公开了其制备方法和应用，以及用于所述可分散油悬浮剂的稳定剂。本发明将烟草花叶病毒核酸干扰素制成可分散油悬浮剂的形式，借助特异性的稳定剂，有效地解决了烟草花叶病毒核酸干扰素易分解、稳定性差的问题，并且，本发明的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂对于防治烟草花叶病毒具有很好的效果，防治效果为80％以上。
一种烟草花叶病毒核酸干扰素分散悬浮及其应用

[发明专利]一种包封siRNA的脂质纳米粒的制备方法-CN202310544267.6在审
发明人：高颖;马樱芳 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2023-05-15 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： A61K9/51 文献下载
摘要：本发明公开了一种包封siRNA的脂质纳米粒的制备方法。本发明针对siRNA‑LNP制备过程与一般脂质体制备过程的差异，在装置上加入了缓冲相通道，可提高有机相和水相溶液混合效率、提升siRNA‑LNP制备过程的可重复性并改善操作精确性，制备出粒径分布均匀、稳定性高的siRNA‑LNP，同时，通过改变水相和稀释相的条件，其与siRNA混合后可以包封siRNA，并以较高的转染率向体内的细胞中递送siRNA，并可避免siRNA在转染前在体内降解。
一种 sirna 纳米制备方法

[发明专利]一种适用于规模化提取dsRNA的方法和应用-CN202110478812.7有效
发明人：秦斌钰;肖建辉;马樱芳;李学文;唐诗语;黄永奎 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2021-04-29 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型的高效规模化提取dsRNA的方法，具体公开一种新型的高效规模化提取微生物工程菌表达的dsRNA的方法，属于生物技术领域。所述方法包括菌体的预处理，缓冲液的配制和添加，两步法均质，切向流浓缩，填料的预处理，两步法结合洗脱。利用本发明的方法提取dsRNA，操作步骤简单，成本低。提取得到的dsRNA在低温干燥后纯度达90%以上，收率可达80%以上。本发明的方法十分有利于规模化dsRNA提取的应用，具有重要的经济价值。
一种适用于规模化提取 dsrna 方法应用

[发明专利]一种用于马铃薯甲虫核酸干扰素制剂的复配乳化剂-CN202310054240.9在审
发明人：陆一鸣;唐雪明;马樱芳;严雪芳;黄永奎 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2023-02-03 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： A01N25/30 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于马铃薯甲虫核酸干扰素制剂的复配乳化剂，所述复配乳化剂按质量百分含量计包括以下组分：平均HLB值在6～9的乳化剂A：10％～25％；平均HLB值在10～16的乳化剂B：25％～35％；平均HLB值在16～20的乳化剂C：10％～20％；抗氧化剂：1％～3％；溶剂：余量。本发明还公开了所述复配乳化剂的制备方法，以及所述复配乳化剂对于提高马铃薯甲虫核酸干扰素制剂的稳定性以及改善马铃薯甲虫核酸干扰素可分散油悬浮剂的表面张力方面的应用。本发明的复配乳化剂不仅制备方法简单，且原料可再生、对环境友好，其用量还较市售常规乳化剂用量更低，可降低企业生产成本。因此，本发明的复配乳化剂马铃薯甲虫核酸干扰素制剂具有良好的应用价值，有望加快RNA干扰技术在农业生产过程中的应用。
一种用于马铃薯甲虫核酸干扰素制剂乳化剂

[发明专利]一种用于防治马铃薯甲虫的双靶点dsRNA及其应用-CN202211735227.1在审
发明人： 马樱芳;唐雪明;黄永奎;张金凤 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-12-31 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于防治马铃薯甲虫的双靶点dsRNA及其应用，本发明构建了一种用于防治马铃薯甲虫的双靶点线性dsRNA表达载体，双靶点具体为snap和cact基因，将该双靶点载体转化至RNaseIII(Dicer酶)缺失的大肠杆菌表达宿主E.coli HT115(DE3)中，经IPTG诱导后成功表达双靶点cact::snap dsRNA。在相同处理条件下，本发明的双靶点cact::snap dsRNA的杀虫效果明显优于单靶点snap dsRNA和cact dsRNA。本发明对于马铃薯甲虫的生物防治具有重要意义，对降低化学农药的使用、延缓抗性产生、维持生态系统的稳定和平衡等方面，均具有重大价值。
一种用于防治马铃薯甲虫双靶点 dsrna 及其应用

[发明专利]一种DNaseI的分泌表达方法-CN202211335250.1在审
发明人：蒋素梅;唐雪明;马樱芳;李学文 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNase I的分泌表达方法，本发明成功构建了分泌表达牛胰腺来源脱氧核糖核酸酶I(DNase I)的重组菌株，本发明选择pET22b载体在大肠杆菌中将DNase I分泌表达到周质空间，获得可溶的、具有较高活性的脱氧核糖核酸酶I。但是由于原核分泌表达表达量过低，本发明进一步采用酵母菌整合表达了牛胰腺来源脱氧核糖核酸酶I，大大提高了表达量，活性也很高。并且分泌到上清的脱氧核糖核酸酶I经过简单的调节pH，再直接上样到Ni FF填料纯化，即可得到纯度高，且活性高的脱氧核糖核酸酶I。
一种 dnasei 分泌表达方法

[发明专利]一种大肠杆菌发酵生产dsRNA的方法-CN202211493696.7在审
发明人：肖建辉;唐雪明;秦斌钰;马樱芳;黄永奎;张恩 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-11-25 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌发酵生产双链RNA(dsRNA)的方法，本发明采用大肠杆菌发酵生产dsRNA，在发酵培养阶段，对发酵罐葡萄糖补糖速度进行控制，选择在细胞生长不同阶段控制不同葡萄糖补料速度，同时在诱导后通过阶段降低温度和阶段降低葡萄糖补糖速度，降低发酵过程中的乙酸积累量，提高发酵水平。发酵周期短、菌体密度低，产率高；而且工艺简单，易提取，环境污染低，降低了生产成本，有利于工业化生产的推广和应用。
一种大肠杆菌发酵生产 dsrna 方法

[实用新型]一种用于细胞粉碎机的取样装置-CN202220155950.1有效
发明人： 马樱芳;肖建辉 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-01-20 - 公布日： 2022-08-16 - 主分类号： G01N1/14 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于细胞粉碎机的取样装置，包括置物杯，所述置物杯的外侧固定连接有第一磁铁环，所述置物杯的内部设置有取样机构，所述取样机构由第二磁铁环、插入管、橡胶塞、吸取管、把手、推杆和连接头组成，所述吸取管的外侧固定连接有第二磁铁环，所述吸取管的内壁活动连接有橡胶塞，所述橡胶塞的上端面固定连接有推杆，所述推杆的上端面固定连接有把手，所述吸取管的下端面连通有连接头。该用于细胞粉碎机的取样装置通过设置有第一磁铁环和第二磁铁环，使其相互配合使用，可以实现将取样机构与置物杯进行磁性连接，方便了对细胞粉碎机的取样装置的使用，提高了细胞粉碎机的取样装置的使用效果和实用性。
一种用于细胞粉碎机取样装置

[发明专利]一种编码蛋白酶K的基因及表达蛋白酶K的菌株-CN202210493543.6在审
发明人： 马樱芳;唐雪明;秦斌钰;肖建辉;蒋素梅;李学文 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-05-07 - 公布日： 2022-08-02 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种编码蛋白酶K的基因及表达蛋白酶K的菌株。本发明提供了一种编码蛋白酶K的基因，GC含量46.71％，该基因可在毕赤酵母中成功且高效表达。本发明还利用分散的、高重复单元——rDNA的NTS片段作为整合位点，将蛋白酶K重组表达质粒转化整合至毕赤酵母基因组中，可提高获得高拷贝重组菌株的概率。本发明筛选获得的蛋白酶K高拷贝重组菌株，在摇瓶水平上，96h发酵粗酶液的酶活力可达45.0U/mL；在发酵罐水平，诱导72h酶活力即可到207.48U/mL。
一种编码蛋白酶基因表达菌株

[发明专利]一种表达全能核酸酶的重组菌及其应用-CN202210493541.7在审
发明人： 马樱芳;唐雪明;蒋素梅;李学文 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2022-05-07 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，公开了一种表达全能核酸酶的重组菌及其应用。本发明用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达系统分泌表达全能核酸酶，不仅避免了毕赤酵母的长周期、高成本的缺陷，同时也实现了目的蛋白的可溶性表达，避免复杂的包涵体复性步骤。本发明使用阴离子交换层析‑凝胶过滤层析两步纯化，可获得高纯度的目的蛋白，纯度约95％，且对核酸具有很好的降解能力。本发明纯化的全能核酸酶不含His标签，可进一步降低全能核酸酶对含His标签的待纯样品的污染，提高样品的纯度。
一种表达全能核酸酶重组及其应用

[发明专利]提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用-CN202011322536.7有效
发明人：陈献忠;杨海泉;张坤杰;马樱芳;沈微;夏媛媛;陈磊 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-11-23 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C07K14/32 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对信号肽M1(MSDEQKKPE QIHRRDILKWGAMAGAAVA)的N端区域进行定向进化，筛选获得具有高效胞外分泌水平的信号肽突变体文库，通过该突变体文库构建获得系列重组蛋白胞外分泌水平显著提高的重组枯草芽孢杆菌菌株。将获得的正向信号肽突变体进行排列组合复合突变，获得具有高效重组蛋白表达分泌水平的信号肽复合突变体，利用其构建获得具有高效胞外蛋白胞外分泌水平的枯草杆菌杆菌突变株。本发明所筛选获得的信号肽突变体，对于重组蛋白在枯草芽孢杆菌中具有高效的胞外蛋白分泌水平，重组蛋白胞外分泌水平提高了15倍以上。本发明方法对信号肽改造及重组蛋白在宿主中的高效分泌与生产具有重要指导意义。
提高枯草芽孢杆菌重组蛋白外生水平信号肽突变体应用

[发明专利]一种抗烟草花叶病毒的核酸农药及其合成、纯化和应用-CN202111032863.3在审
发明人： 马樱芳;李学文;秦斌钰;张金凤;肖建辉;黄永奎 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2021-09-03 - 公布日： 2021-11-30 - 主分类号： C12N15/40 文献下载
摘要：本发明提供了一种抗烟草花叶病毒的核酸农药及其合成、纯化和应用，TMV‑cp基因两端分别含有一个T7启动子，序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pT7B‑TMV‑EcoRI‑EcoRI‑cp采用TMV‑cp基因，在T7启动子的两侧引入EcoRI酶切位点得到；加入内切酶EcoRI，消化获得体外转录的模板，加入含肌苷酸的三磷酸核苷混合物体外转录并纯化，得到TMV‑cp(I)‑dsRNA；本发明首次使用生物法合成经肌苷酸修饰的dsRNA，该核酸农药在不同温度和不同紫外条件下具有稳定性，具有防治烟草花叶病毒的巨大潜力；该核酸农药对环境无毒无害，成本控制及应用方面均获得良好效果，有望成为优秀的生物农药。
一种烟草花叶病毒核酸农药及其合成纯化应用

[实用新型]一种便于清洗的消毒液生产用反应釜-CN202022287845.7有效
发明人：唐雪明;黄永奎;马樱芳;秦斌钰;张美亿 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2020-10-14 - 公布日： 2021-07-20 - 主分类号： B01J19/18 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种便于清洗的消毒液生产用反应釜，属于化工设备技术领域，包括：壳体组件，包括外壳，所述外壳外侧设置有第一螺纹孔；内胆组件，包括内胆,所述内胆下端设置有出料口，所述内胆外侧设置有第二螺纹孔；所述螺栓穿过第二螺纹孔和第一螺纹孔延伸至外壳外一端活动连接有螺母；控流组件，包括旋钮，所述旋钮下端固定连接有旋杆，在反应釜生产完工作人员需要清洗反应釜时，先按动控制开关启动电机使搅拌轴旋转利用离心力清除搅拌轴和搅拌叶上残留的液体后，只需转动螺母，取出螺栓，分离内胆和外壳，取出内胆清洗即可，方便快捷，清洗彻底使用范围广，本实用新型，适合被广泛推广和使用。
一种便于清洗消毒液生产反应

[实用新型]一种制粒均匀的果蔬净生产用沸腾制粒机-CN202022250791.7有效
发明人：唐雪明;秦斌钰;马樱芳;肖建辉;张美亿 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2020-10-10 - 公布日： 2021-07-09 - 主分类号： B01J2/16 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种制粒均匀的果蔬净生产用沸腾制粒机，属于沸腾制粒机领域，所述圆盘固定连接在制粒器内部，所述圆盘顶部配合连接有一号横杆和二号横杆，所述一号横杆和二号横杆相交，所述一号横杆与二号横杆相交处镶嵌连接有转轴，所述圆盘一侧设有开口，所述开口呈三角状，所述圆盘底部固定连接有电机，所述电机输出端连接有转轴输入端，通过进料口进料，进料进入后会落到圆盘上，圆盘上有一号横杆和二号横杆，一号横杆和二号横杆中心有转轴，转轴通过圆盘底部的电机带动，电机运作时转轴转动，带动一号横杆和二号横杆转动，使落到圆盘上的物料均匀的进入制粒器，使物料制粒均匀，从而提高整体品质。
一种均匀果蔬净生产沸腾制粒机

[实用新型]一种高效的消毒液生产用反应釜-CN202022250794.0有效
发明人：唐雪明;秦斌钰;黄永奎;马樱芳;李学文;张美亿 -专利权人：硅羿科技（上海）有限公司
申请日： 2020-10-10 - 公布日： 2021-07-09 - 主分类号： B01J4/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种高效的消毒液生产用反应釜，属于消毒液生产技术领域，包括：进料组件、破碎组件、密封组件、罐体组件、出料组件、底座组件和搅拌组件，设有固体原料入料口，并且设有破碎机，能够将固体原料破碎成小颗粒状，在经过过滤器过滤后倒入反应釜中，防止内部搅拌叶损坏，顶盖设有两个液体入料口，固体和液体入料口分开，人工只需要将液体入料口的阀门打开便可加入液体原料，能够防止液体飞溅，降低危险，并且方便使用，反应釜罐体表面设有玻璃层，能够清楚的观察到反应釜内部的情况，当出现意外情况时能够及时做出调整，并且出料口处设有过滤网，能够将为完全反应的固体原料阻挡在管体内部，不会进入出料管到造成管道阻塞。
一种高效消毒液生产反应

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