本发明涉及生物技术领域,具体涉及青虾Cathepsin L基因及其dsRNA的应用,包括青虾CathepsinL基因、基因片段及其dsRNA,以及dsRNA在抑制青虾卵巢发育中的应用。而后利用RNA干扰等技术获得序列为SEQ ID No.3、SEQ ID No.8基因片段,由这两个基因片段合成dsRNA1、dsRNA2。将上述合成的dsRNA1、dsRNA2注入雌性青虾围心腔后,得到dsRNA1可以有效减缓雌性青虾卵巢发育速度。
本发明公开了一种抑制稻瘟病菌关键基因、dsRNA及其制备和应用,所述关键基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、ID NO.7、ID NO.9任一所示,还公开了抑制稻瘟病菌关键基因dsRNA为含有T7启动子的MoCytb基因的dsRNA、MoRic8基因的dsRNA、MoTrx2基因的dsRNA、MoMBF1基因的dsRNA或MoEnd3基因的dsRNA中的任意一种,本发明合成的dsRNA稳定性强,能够抑制水稻稻瘟病菌孢子萌发、附着胞和芽管形成,进而有效防治水稻稻瘟病。本发明还公开dsRNA在用于制备生物杀菌剂抗菌中的应用,效果明显且绿色环保。
本发明提供了一种Gustavus基因及其应用、由其合成的dsRNA及dsRNA的制备方法与应用,Gustavus基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示,dsRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.3dsRNA的制备方法:以Gustavus基因的DNA序列为模板,合成Gustavus基因片段;Gustavus基因片段作为模板,设计含有T7启动子序列的引物对;通过PCR扩增得到所述dsRNA合成模板;体外合成dsRNA。通过dsRNA技术,使得蚜虫生殖细胞在发育过程中出现障碍,无法形成正常的胚胎从而达到降低蚜虫种群数量的目的。
一种用于检测dsRNA在动物体内降解规律的技术方法,它涉及一种检测一类新生物技术药物代谢的技术方法。动物应用dsRNA后一定时间内,取动物血清样本,提取RNA,点样于1%琼脂糖凝胶进行电泳分析,根据电泳条带的迁移率,判断dsRNA分子大小的降解程度;用BandLeader Ver 3.00软件对电泳条带的亮度进行分析,计算得到样本中dsRNA的含量,用以判断dsRNA从体内代谢的快慢。解决了dsRNA类药物在动物体内降解情况的定量测定问题,对于dsRNA类药物的药物代谢动力学的研究方法具有重要实际应用意义。