本发明公开了一种仅具有RNA靶切割活性的原核Argonaute蛋白质在RNA编辑中的应用，所述Argonaute蛋白质来源于中温原核生物Verrucomicrobia bacterium，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示或为与SEQ ID NO:1相似度极高且具有相同功能的蛋白质；该蛋白质对单链向导DNA具有结合活性，并且仅仅只对与单链向导DNA互补配对的RNA靶具有核酸酶活性，故可利用该蛋白质进行体内外靶向RNA编辑，为RNA编辑提供了一个全新的有力工具。
本发明公开了一种中高温Argonaute蛋白在特异性切割靶核酸中的应用，所述Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该Argonaute蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了上述Argonaute蛋白的体外合成方法，并发现该蛋白对两种向导5’OH‑gRNA和5’P‑gRNA具有结合活性，其能够利用这两种向导去切割靶ssDNA和利用5’OH‑gRNA去切割靶RNA，实现靶向DNA或靶向RNA编辑，同时还可切割质粒。因此，本发明为基于原核生物来源的Argonaute蛋白的基因克隆和分子检测提供了一种新的工具。
本发明公开了具有中温靶核酸切割活性的PfAgo突变体蛋白及其应用，所述PfAgo突变体蛋白相对于SEQ ID NO.1所示序列，具有第617位和/或618位的氨基酸突变，具体为：K617E/G和/或L618Y/F/W/G。相对于野生型PfAgo蛋白，本发明提供的PfAgo突变体蛋白在30～95℃的温度范围均有活性，有效扩展了pAgo蛋白的使用范围。
本发明公开了基于Argonaute蛋白TcAgo的核酸切割体系及其应用，所述核酸切割体系包括向导DNA、Argonaute蛋白TcAgo和报告核酸，所述TcAgo的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或如与SEQ ID NO.1具有至少85％的序列一致性且具有相同功能的序列所示，该核酸切割体系可应用于核酸检测、富集低丰度核酸和基因克隆等生物技术领域，且具有良好的应用前景。
本发明公开了一种无引物的基因合成方法，属于基因的人工合成领域。本发明首先公开了一个pNew载体质粒，其核苷酸序列为SEQ ID NO.33所示。本发明还公开了用pNew载体质粒构建的包含有16384(47)个质粒的载体库。本发明进一步公开了一种无引物的基因合成方法，包括以下步骤：(1)将待合成的目标基因DNA序列按照每个片段82bp进行分组；(2)将分组的片段分别在构建的质粒库中找到对应的质粒；(3)将对应的质粒酶切，用抗生素筛选，重构得到含82bp目的基因序列的质粒；(4)通过金门克隆反应将基因片段拼接成完整的目的基因。本发明基因合成方法不需要利用引物，合成成本低，突变率极其低，准确率高，可以合成诸如高度重复序列、Poly A等特殊的基因序列，操作简单，能实现自动化操作。
