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[发明专利]一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法-CN201910486085.1有效
发明人：张君轩;付妍;付雪蓉;解雨晨;任泓宇;刘立明;刘佳;陈修来 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-06-05 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法，属于生物工程技术领域。利用本发明的方法对共表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶的大肠杆菌进行湿细胞收集与保存，湿菌体保存2个月后，利用解冻后湿细胞转化生产L‑2‑氨基丁酸，底物L‑苏氨酸转化率达到96.8％，三种酶的相对于新鲜湿细胞的酶活均能达到90.0％以上。
一种基因工程细胞收集保存方法

[发明专利]一种利用Y家族聚合酶Rev1调节酿酒酵母氧胁迫的方法-CN201910911697.0有效
发明人：吴静;姚瑞;刘立明;陈修来;刘佳;罗秋玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-09-25 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用Y家族聚合酶Rev1调节酿酒酵母氧胁迫的方法，属于生物工程技术领域。通过同源重组的方法敲除基因REV1，构建敲除菌株rev1Δ，使得酵母菌株抗氧化胁迫能力降低，具体表现为胁迫条件下敲除菌株生物量降低9％，存活率降低34.8％，基因突变频率降低63.8％，丙酮酸产量降低30.8％。利用pY26质粒过表达基因REV1，构建过表达菌株rev1Δ/REV1，使得菌株抗氧化胁迫能力增强，具体表现为生物量提高8.3％，存活率提高11.5％，基因突变频率提高186.2％，丙酮酸产量提高57.7％。上述结果表明Rev1可以提高酵母菌株在氧胁迫条件下的生存能力和发酵性能。
一种利用家族聚合 rev1 调节酿酒酵母胁迫方法

[发明专利]一株产正丁酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用-CN201910738599.1有效
发明人： 陈修来;郭亮;刘立明;刁文文;刘佳;罗秋玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-08-12 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株产正丁酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用，属于发酵工程技术领域。本发明以Escherichia coli ATCC 8739为出发菌株，利用代谢工程手段，通过构建丁酸的合成路径以及切断冗余代谢支路构建了生产丁酸的大肠杆菌基因工程菌。在发酵72h后丁酸的产量达到15g/L。该发酵过程为好氧发酵，菌体生长快，发酵周期短，产酸速率高，目前未见直接利用甘油发酵生产丁酸的报道。该方法采用的发酵工艺简单，易于控制，生产成本低，有利于工业化生产的推广和应用。
一株产正丁酸大肠杆菌工程构建应用

[发明专利]一种合成对羟基扁桃酸的方法-CN201911367276.2有效
发明人：刘立明;王蕾;刘佳;宋伟;陈修来;罗秋玲;高聪 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-12-26 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成对羟基扁桃酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段构建了一株双质粒重组菌，共表达丙酮酸脱羧酶、苯乙醛脱氢酶和NADH氧化酶基因，将构建好的表达质粒导入E.coli BL21(DE3)。将对羟基苯甲醛和乙醛酸转化为对羟基扁桃酸，并通过NADH氧化酶辅酶再生系统，通过将NADH转化为NAD+，使得NAD+循环再生，转化能够高效进行。并通过优化底物浓度及比例，优化转化温度和pH，实现了对羟基扁桃酸的高效生产。在30℃、pH7的条件下反应24h，可将30mM的底物对羟基苯甲醛转化为28.5mM的对羟基扁桃酸，转化率可达到95％。
一种成对羟基扁桃方法

[发明专利]内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用-CN202110203953.8在审
发明人：吴静;卢翠;刘佳;宋伟;陈修来;高聪 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-02-23 - 公布日： 2021-05-04 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明公开了内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的改造方法通过组合突变设计出最佳突变体，对PvDAPDH的蛋白质进行改造，克服了之前野生型的酶因为活性低而导致的转化率低的局限，最终得到最佳突变体L7(PvDAPDHW121A/H227I/R180S)，其酶活为野生型的85倍；将该突变体L7进一步与L‑氨基酸脱氨酶(PmLAAD)和葡萄糖脱氢酶(BmGDH)级联，以L‑苯丙氨酸为底物，D‑苯丙氨酸产量达到48.5g/L，因此大大降低了之前的高菌体量以及昂贵的底物成本，为D‑苯丙氨酸的工业化生产奠定了基础。
内消旋二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用

[发明专利]固定化重组大肠杆菌将L-缬氨酸转化为α-酮缬氨酸的方法-CN202110072127.4在审
发明人：吴静;代静新;宋伟;周怡雯;陈修来;高聪;刘佳 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-01-20 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C12P7/50 文献下载
摘要：本发明公开了固定化重组大肠杆菌将L‑缬氨酸转化为α‑酮缬氨酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明将能够表达L‑氨基酸脱氨酶的基因工程菌包埋在纳米四氧化三铁‑聚乙烯醇‑海藻酸钠复合载体中，将固定化细胞用于L‑缬氨酸转化为α‑酮缬氨酸。所得固定化细胞稳定性好，连续使用8批次后，仍具有较高的活力，对底物的利用率高，降低了生产成本。
固定重组大肠杆菌缬氨酸转化方法

[发明专利]固定化重组大肠杆菌利用L-苯丙氨酸生产L-苯丙酮酸-CN202110072132.5在审
发明人：吴静;代静新;宋伟;周怡雯;陈修来;高聪;刘佳 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-01-20 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： C12N11/14 文献下载
摘要：本发明公开了固定化重组大肠杆菌利用L‑苯丙氨酸生产L‑苯丙酮酸，属于生物催化技术领域。本发明采用吸附‑交联法，将表达来自奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组大肠杆菌固定在硅藻土‑聚乙烯亚胺‑戊二醛的复合载体中，经优化后，用于L‑苯丙氨酸生产L‑苯丙酮酸。所得固定化细胞总酶活回收60％。以固定化的大肠杆菌E.coli细胞做为生物催化剂催化L‑苯丙氨酸生产L‑苯丙酮酸的生物制备，底物浓度100g/L，反应时间16h，转化率在60％以上。将固定化细胞回收利用，重复反应8批，酶活没有明显下降，各批次底物转化率均大于50％。
固定重组大肠杆菌利用苯丙氨酸生产丙酮酸

[发明专利]一种高通量筛选α-酮酸高产菌株的方法-CN202011588760.0在审
发明人：吴静;武耀运;宋伟;周怡雯;陈修来;刘佳;高聪 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-12-29 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高通量筛选α‑酮酸高产菌株方法，属于生物工程技术领域。本发明对来源于奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD进行蛋白质工程改造，并使用高通量筛选的方法，在96孔板中培养含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组菌株及菌株突变体，并进行转接诱导，离心收集含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的细胞来转化L‑氨基酸(L‑缬氨酸、L‑甲硫氨酸及L‑苯丙氨酸)生成其对应的α‑酮酸，并利用2,4‑二硝基苯肼显色后于520nm处读取吸光值，并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证，筛选得到α‑酮酸产量显著提高的菌株。
一种通量筛选高产菌株方法

[发明专利]一种耐受高浓度葡萄糖的L-丙氨酸生产菌株及其应用-CN201811234785.3有效
发明人：刘立明;刘佳;陈修来;罗秋玲;张权 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-10-23 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C12N1/36 文献下载
摘要：本发明公开了一种发酵生产L‑丙氨酸的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将生产L‑丙氨酸的大肠杆菌作为出发菌株，在高浓度葡萄糖培养基中进行适应性进化，获得了高浓度葡萄糖下发酵生产L‑丙氨酸的新型菌种FMME‑A232，使得在生产L‑丙氨酸的过程中能够耐受浓度高达180～220g/L的葡糖糖，相对于申请号201810033877.9中生产L‑丙氨酸的过程中只能够耐受浓度为80～100g/L的葡糖糖，其高浓度葡萄糖耐受能力得到了大大提高，使得发酵过程中无需多次添加葡糖糖，而一次添加即可，简化了发酵工艺，且利用该重组菌株在发酵罐中发酵55h，L‑丙氨酸产量可达到171.0g/L。
一种耐受浓度葡萄糖丙氨酸生产菌株及其应用

[发明专利]一种提高L-丙氨酸生产效率的方法及其应用-CN201811344798.6有效
发明人：刘立明;刘佳;罗秋玲;张权;陈修来 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-11-13 - 公布日： 2021-03-26 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高L‑丙氨酸生产效率的方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用基因工程手段对筛选得到在高浓度葡萄糖下生长产酸的突变株FMME‑A232进行改造，强化葡萄糖的转运路径，使用pEtac质粒串联表达葡萄糖转运蛋白EI蛋白和EIIAClc蛋白得到大肠杆菌重组菌，该大肠杆菌重组菌能够提高葡萄糖的消耗速率，使得该菌株发酵周期由55h降至45h，L‑丙氨酸产量达到160.8g/L，提高了L‑丙氨酸的生产效率。
一种提高丙氨酸生产效率方法及其应用

[发明专利]一种多酶级联生产(R/S)-羟基蛋氨酸的方法-CN201911128392.9有效
发明人：刘立明;刘佳;张灿;宋伟;罗秋玲;陈修来;高聪;叶超 -专利权人：江南大学;无锡宸明生物技术有限公司
申请日： 2019-11-18 - 公布日： 2021-03-02 - 主分类号： C12P7/42 文献下载
摘要：本发明公开了一种多酶级联生产(R/S)‑羟基蛋氨酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明利用一锅法同步反应催化蛋氨酸生产(R)‑HMTBA，通过分批补料解除底物抑制，转化周期由23h缩短至15h，(R)‑HMTBA产量可达到97.0g/L，ee99％，蛋氨酸摩尔转化率达到96.3％；利用一锅法同步反应催化蛋氨酸生产(S)‑HMTBA，通过分批补料解除底物抑制，转化周期由23h缩短至18h，(S)‑HMTBA产量可达到98.0g/L，ee99％，蛋氨酸摩尔转化率达到98.6％。
一种级联生产羟基蛋氨酸方法

[发明专利]蛋白拨动开关的构建及其在混合糖发酵生产木糖酸的应用-CN201910670796.4有效
发明人： 陈修来;高聪;刘立明;罗秋玲;刘佳 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-07-24 - 公布日： 2021-03-02 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明公开了蛋白拨动开关的构建及其在混合糖发酵生产木糖酸的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建的蛋白水平拨动开关，由于调控发生在蛋白水平，原理是蛋白酶触发的切割和诱导降解，其响应时间短，调控精度高。利用本策略，当底物中葡萄糖与木糖浓度比值大于1时，可以有效缓解碳代谢阻遏现象。当葡萄糖：木糖的比例为2:1时，引入拨动开关可较对照组提高木糖酸产量0.79倍。利用该工具，以廉价纤维素水解液为底物生产高附加值化学品时具有较好的应用前景。
蛋白拨动开关构建及其混合发酵生产木糖酸应用

[发明专利]一种高产γ-氨基丁酸的方法-CN201810264153.5有效
发明人：刘佳;刘立明;罗秋玲;陈修来 -专利权人：江南大学;无锡宸明生物技术有限公司
申请日： 2018-03-28 - 公布日： 2020-12-29 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产γ‑氨基丁酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过蛋白质工程改造巨大芽孢杆菌来源的谷氨酸脱羧酶，改造后的谷氨酸脱羧酶基因连接于pET24a载体，在E.coli BL21(DE3)中表达。在发酵罐中培养重组菌株，用于转化谷氨酸生产γ‑氨基丁酸，湿细胞添加量7.0g/L，转化周期8h，产量可以达到425.0g/L，谷氨酸摩尔转化率达到99％，γ‑氨基丁酸的时空产率为53.1g/L/h。
一种高产氨基丁酸方法

[实用新型]一种油板精密热冲模具-CN201922493093.7有效
发明人：蒋昊;蒋国语;陈修来;贾健;朱瑞华 -专利权人：江苏昊冠精密机械制造有限公司
申请日： 2019-12-31 - 公布日： 2020-12-08 - 主分类号： B21D28/34 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种油板精密热冲模具，包括下模座和上模座，所述下模座和上模座内侧面分别固定设有下垫板和上垫板，所述上模座上端部通过上垫脚连接有上托板，所述上托板下端部通过氮气弹簧连接有上夹板，所述上垫板下端面中部固定安装有冲头，所述冲头下端部固定套接有脱料板，所述下垫板上端部通过螺栓连接有下模板，所述下模板和止挡板中部均设有螺旋冷却腔，所述螺旋冷却腔前后端部分别设有进油管和出油管。该种油板精密热冲模具，采用精密热冲模具将产品的孔冲出，同时模具采用油冷却以减少模具受热后强度和精度的降低。取代了加工中心切屑加工，提高了加工效率20倍，节约了材料成本和加工成本。
一种精密模具

[发明专利]一种L-氨基酸氧化酶的突变体-CN201811350819.5有效
发明人：吴静;裴杉杉;刘佳;陈修来;罗秋玲;张权 -专利权人：江南大学;无锡宸明生物技术有限公司
申请日： 2018-11-14 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种L‑氨基酸氧化酶的突变体及其制备方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于谷氨酸棒杆菌的L‑氨基酸氧化酶进行定点突变，获得突变体Q183A，将突变体Q183A在大肠杆菌中进行异源表达，得到的重组菌对L‑缬氨酸的催化效率提高了18.7％，α‑酮异己酸的产量达到54.6g/L，底物摩尔转化率为84.6％。本发明提供的全细胞转化方法较化学法相比，具有反应条件温和，目标产物单一，易于分离，对环境友好等优势，且工艺简单，便于控制，易于推广应用。
一种氨基酸氧化酶突变体